한국발생생물학회지:발생과생식 (Development and Reproduction)
- 제10권1호
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- Pages.63-73
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- 2006
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- 2465-9525(pISSN)
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- 2465-9541(eISSN)
양막 유래 줄기세포의 간세포로의 분화 유도
In Vitro Differentiation of Human Amniotic Membrane-derived Stem Cells into Hepatocyte-like Cells
- 국민지 (서울여자대학교 자연과학대학 생명공학과) ;
- 박수연 (서울여자대학교 자연과학대학 생명공학과) ;
- 강현미 (서울여자대학교 자연과학대학 생명공학과) ;
- 김해권 (서울여자대학교 자연과학대학 생명공학과)
- Kook, Min-Ji (Dept. of Biotechnology, College of Natural Sciences, Seoul Women's University) ;
- Park, Soo-Yeon (Dept. of Biotechnology, College of Natural Sciences, Seoul Women's University) ;
- Kang, Hyun-Mi (Dept. of Biotechnology, College of Natural Sciences, Seoul Women's University) ;
- Kim, Hae-Kwon (Dept. of Biotechnology, College of Natural Sciences, Seoul Women's University)
- 발행 : 2006.06.30
초록
간질환 환자의 대부분은 간 조직 손상으로 인해 간세포의 재생 능력이 감소한다. 간세포 이식은 이러한 간질환을 치료하는데 있어 혁신적인 방법으로 대두되고 있으나, 여전히 많은 의문과 문제점이 제기되고 있다. 사람의 양막으로부터 얻은 줄기 세포를 이용하여 간세포 분화를 위한 최적의 조건을 알아 보고자 하였다. 세포내 알부민에 대한 면역 화학적 방법, 세포내 글리코겐의 특이 염색법, 세포의 형태적 변화 연구 방법 등을 이용하여 여러가지 배양 조건을 조사한 결과, 배양 접시를 fibronectin으로 coating하고 배양액내에 insulin/transferrin/selenium(ITS)을 첨가하는 것이 양막 줄기세포의 간세포로의 분화에 효과적이었다. 또한 배양액내에 fibroblast growth factor(FGF)-1과 FGF-2를 함께 첨가하는 것이 둘 중 하나만 첨가하거나 첨가하지 않는 것보다 효과적이었다. 한편 분화 배양은 한가지 배양액을 사용한 지속적인 배양법(continuous culture method)보다 배양 조건을 달리하여 두 단계로 배양하는 2단계 배양법(two-step culture method)가 훨씬 효과적이었다. 마지막으로, 기본 배양액에 FGF-2와 FGF-4를 첨가한 조건과 FGF-4와
This study aimed to find out suitable culture conditions for the differentiation of human amniotic membrane-derived stem cells(HAM) into hepatocyte-like cells. Almost homogenous population of fibroblast-like cells was successfully isolated from the amniotic membrane. In comparison to the non-coated plates and in the absence of insulin/transferrin/selenium(ITS), HAM cultured on the fibronectin-coated plates and in the presence of ITS showed the more intense immunocytochemical staining against the albumin. Addition of both fibroblast growth factor(FGF)-1 and -2 to the differentiation medium gave stronger staining compared to the treatment with FGF-1 or -2 alone. Periodic acid Schiff's base staining of glycogen and morphological turnover of fibroblast-like appearance of HAM into round shape matched the results of immunocytochemical studies. When the efficiency of two-step culture method was examined on the differentiation of HAM into hepatocyte-like cells, all of the results of immunocytochemical staining, periodic acid Schiff's staining and morphological change exhibited effective hepatic differentiation of HAM compared to the continuous culture method. Immunoblot analyses of HAM- conditioned media against the albumin showed that the culture of HAM in the presence of both ITS and fibronectin always gave a stronger staining intensity than those in the absence of them, and that the addition of ether mixture of FGF-4 and either FGF-2 or transforming growth