Abstract
A phenanthrene-degrading bacterium HS362, which is capable of using phenanthrene as a sole carbon and energy source, was isolated from oil contaminated soil. This strain is a gram negative, rod shaped organism that is most closely related to Sphingomonas paucimobilis based on biochemical tests, and belongs to the genus Sphingomonas based on fatty acids analysis. It exhibited more than $99.2{\%}$ nucleotide sequence similarity of 16S rDNA to that of Sphingomonas CF06. Thus, we named this strain as Sphingomonas sp. HS362. It degraded $98{\%}$ of phenanthrene after 10 days of incubation when phenanthrene was added at 500 ppm and $30{\%}$ even when phenanthrene was added at 3000 ppm. Sphingomonas sp. HS362 could also degrade low molecular weight PAHs(Polycyclic aromatic hydrocarbons) such as indole and naphthalene, but was unable to degrade high molecular weight PAHs such as pyrene and fluoranthene. The optimum temperature and pH for phenanthrene degradation were $30^{\circ}C$ and $4{\~}8$, respectively. Sphingomonas sp. HS362 could degrade phenanthrene effectively in the concentration range of NaCl of up to $1{\%}$. Its phenanhrene degrading ability was enhanced by preculture, suggesting the possibility of induction of phenanthrene degrading enzymes. Starch and surfactants such as SDS, Tween 85, and Triton X-100 were also able to enhance phenanthrene degradation by Sphingomonas sp. HS362. It carries five plasmids and one of them, plasmid p4, is considered to be involved in the degradation of phenanthrene according to the plasmid curing experiment by growing at $42^{\circ}C$.
유류에 의해 오염된 토양으로부터 난분해성 물질인 phenanthrene을 유일한 탄소원과 에너지원으로 이용하며 성장하는 균주들을 분리한 후, 그중에서 분해능이 가장 우수한 균주를 선별하여 HS362라고 명명하였다. HS362는 생화학적 검사로는 Sphingomonas paucimobilis와, 16S rDNA 염기서열 분석으로는 Sphingomonas CF06과 가장 유사한 것으로 나타났고, 지방산분석 결과도 그람음성 간균인 Sphingomonas 속으로 판명되었으므로 Sphingomonas sp. HS362라고 명명하였다. 이 균은 500 ppm의 phenanthrene을 단일 탄소원으로 첨가한 경우, 10일 만에 $98{\%}$ 이상을 분해하였고,3000 ppm의 phenanthrene이 첨가된 경우에도 10일 만에 약$30{\%}$ 이상을 분해하는우수한 균임이 확인되었다. 또한 이 균은PAH들(Polycyclic aromatic hydrocarbons) 중에서 phenanthrene 이외에도 분자량이 적은 indole, naphthalene은 분해할 수 있는 반면에, 분자량이 큰 pyrene, fluoranthene은 분해하지 못하였다. Spitingomonas sp. HS362에 의한 phenanthrene 분해는$30^{\circ}C$, pH $4{\~}8$, NaCl $1{\%}$ 이하의 농도인 조건하에서 배양했을 때 가장 우수했으며, 특히 전분과 SDS, Tween 85, Triton X-100와 같은 계면활성제를 첨가해 주었을 때 분해가 증진되었다. 또한, 전배양을 통해서 phenanthrene의 분해가 증진되는 것을 볼 때에 분해효소가 유도되는 것으로 추측할 수 있었다. Spltingomonas sp. HS362는 5개의 plasmid를 가지고 있는데, 그중에서 plasmid p4를 잃었을 때에는phenanthrene을 분해하지 못하는 것으로 보아plasmid p4가 phenanthrene분해와 밀접한 관련이 있는 것으로 보인다.