Clinical and Experimental Reproductive Medicine

  • 제31권1호
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  • Pages.41-50
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  • 2004
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  • 2233-8233(pISSN)
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  • 2233-8241(eISSN)
대한생식의학회 (The Korean Society for Reproductive Medicine)
권호 표지

Minimum Volume Cooling 방법을 이용한 효율높은 인간배아줄기세포동결

A New Efficient Cryopreservation of Human Embryonic Stem Cells by a Minimum Volume Cooling Method

  • 김은영 (마리아 기초의학연구소/마리아바이오텍) ;
  • 박세영 (마리아 기초의학연구소/마리아바이오텍) ;
  • 윤지연 (마리아 기초의학연구소/마리아바이오텍) ;
  • 길광수 (마리아 기초의학연구소/마리아바이오텍) ;
  • 이창현 (마리아 기초의학연구소/마리아바이오텍) ;
  • 이건섭 (마리아 기초의학연구소/마리아바이오텍) ;
  • 태진철 (마리아 기초의학연구소/마리아바이오텍) ;
  • 김남형 (충북대학교) ;
  • 이원돈 (마리아불임병원) ;
  • 정길생 (건국대학교) ;
  • 박세필 (마리아 기초의학연구소/마리아바이오텍) ;
  • 임진호 (마리아불임병원)
  • 발행 : 2004.03.30
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초록

연구 목적: 본 연구는 인간배아줄기세포 동결에 minimum volume cooling (MVC) 초자화 동결방법이 유용하게 이용될 수 있는지의 여부를 조사하고자 실시하였다. 연구재료 및 방법: 인간배아줄기세포 콜로니는 0.05% collagenase 처리와 기계적 처리에 의해 작은 clumps로 자른 다음 동결 방법에 따른 효율을 비교 검토하고자, i) 대략 40-50개의 clumps를 10% DMSO가 들어있는 동결액에 $5{\sim}10$분간 처리하여 1ml cryo-vial에 넣고 slow-cooling용 cryo-module에 장착하고 -80C에서 overnight한 후 $LN_2$에 침지하여 완만동결을 실시하거나 ii) 10% ethylene glycol (EG)이 들어 있는 동결액에서 5$\sim$10분 처리하고 30% EG과 0.5 mol sucrose가 들어 있는 동결액에서 30초간 처리하여 본 연구를 위해 개발된 MVC straw에 10 clumps씩 적재한 다음 $4{\sim}5$ MVC straw를 $LN_2$가 들어있는 cryo-vial에 넣어 MVC 초자화동결을 실시하였다. 융해 후 생존율을 조사하였고 배아줄기세포의 특성을 유지하고 있는지의 여부를 조사하였다. 결 과: 융해 후, 인간배아줄기세포의 생존율은 완만동결을 실시했던 군 (20.0%) 보다 MVC 초자화동결을 실시했던 군에서 (76.0%) 유의하게 높게 나타났다. 또한 회복과정에서 완만동결을 실시했던 군에서는 세포성장이 매우 더디고 안 좋은 반면, MVC 초자화동결을 실시했던 군은 배아줄기세포의 증식이 동결을 실시하지 않은 세포와 같은 상태로 2주 이후부터 빠르게 전환되고 회복되는 것을 확인할 수 있었다. 이와 더불어 MVC 초자화동결－융해 후 회복된 배아줄기세포에서 정상 핵형, alkaline phosphatase acitivity, SSEA-4와 TRA-1-60 염색 및 Oct-4 발현을 확인하였으며 체외분화의 특성도 확인하였다. 결 론: 새로이 개발된 MVC 초자화동결을 이용하면 인간배아줄기세포는 고유의 특성을 잃지 않고 성공적으로 동결될 수 있다.

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