Abstract
Bacterial infection of canine atopic dermatitis is largely caused by Staphylococcus intermedius and may be a superficial or deep pyoderma. The Purpose of this study was to identify the major proteins of S. intermedius cell surface components in humoral immune response of atopic dermatitis dog. Sera samples were obtained from dogs with atopic dermatitis and superficial pyoderma referred to the Veterinary Medical Teaching Hospital, Konkuk University. An isolate of S. intermedius from a clinical case of canine atopic dermatitis was cultured in brain heart infusion broth overnight at $37^{\circ}C$ in aerobic conditions on an orbital shaker. Following culture, Staphylococci were harvested by centrifugation, washed in PBS, and resuspended in PBS containing lysostaphin. The soluble components were separated by centrifugation and were collected. The soluble extract of S. intermedius was separated by sodium dodecylsulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The proteins were electrophoretically transferred onto nitrocellulose membrane. Western blotting for the specificity of serum IgG antistaphylococcal antibody was performed with anti-dog-IgG and sera obtained from an atopic dermatitis case and a normal dog. The molecular masses of four major proteins of S. intermedius recognized by serum obtained from an atopic dermatitis case were 18, 31, 75, and 110 kDa as determined by Western blot analysis. The present study indicates that most dogs of S. intermedius infection with atopic dermatitis could have a significant humoral immune response to bacterial proteins of the causative organism.
개의 아토피성 피부염의 주된 세균성 감염은 Staphylococcus intermedius에 의해 발생한다. 본 연구의 목적은 아토피성 피부염을 가지고 있는 환견의 혈청과 정상견의 혈청을 이용하여 체액성 면역반응을 유발하는 주된 세균단백질을 규명하는데 있다. 건국대학교 수의과대학 부속동물병원에 내원한 아토피성 피부염 및 표재성 세균성 농피증을 앓고 있는 환견의 혈청 및 정상견의 혈청을 분리하여 본 실험에 사용하였으며 아토피성 피부염을 가지고 있는 환견에서 S. intermedius 균을 분리하였다. Brain heart infusion 액체배지 조건 및 $37^{\circ}C$ 배양조건에서 호기상태로 증균시켰으며 증균후 포도상구균을 PBS완충액에 부유시킨후 원심분리하고 최종적으로 lysostaphin을 이용하여 세균단백질을 분리하였다. 수거한 세균단백질은 SDS-PAGE을 이용하여 단백질을 전기영동하였으며 영동후 nitrocellulose membrane을 이용하여 단백질을 이동시켰다. Western blot은 anti-dog-IgG, 아토피성 피부염의 혈청 및 정상혈청을 이용하였다. 결론적으로 아토피성 피부염의 혈청을 이용해 확인한 S. intermedius의 주요 세균단백질은 18, 31, 75, 및 110 kDa이였다. 현재의 연구결과로 볼 때 아토피성 피부염에 감염된 대부분의 환견은 S. intermedius의 세균단백질에 대한 체액성 면역반응이 유발된다고 생각된다.
