Clinical and Experimental Reproductive Medicine

The Korean Society for Reproductive Medicine (대한생식의학회)
권호 표지

Endometrial Cell Culture: Isolation, Characterization, and Immortalization

자궁내막 세포의 분리 및 배양 그리고 불멸화된 세포주의 확립

  • Hong, In-Sun (Lab of Stem cell and Tumor Biology, Department of Veterinary Public Health, College of Veterinary Medicine, Seoul National University) ;
  • Kim, Seok-Hyun (College of Medicine, Seoul National University Laboratory of Reproductive Biology and Infertility) ;
  • Koong, Mi-Kyoung (Biology and Infertility, Samsung Cheil Hospital and Women's Healthcare Center, Sungkyunkwan University School of Medicine) ;
  • Jun, Jin-Hyun (Biology and Infertility, Samsung Cheil Hospital and Women's Healthcare Center, Sungkyunkwan University School of Medicine) ;
  • Lee, Yong-Soon (Lab of Stem cell and Tumor Biology, Department of Veterinary Public Health, College of Veterinary Medicine, Seoul National University) ;
  • Kang, Kyung-Sun (Lab of Stem cell and Tumor Biology, Department of Veterinary Public Health, College of Veterinary Medicine, Seoul National University)
  • 홍인선 (서울대 수의과대학 공중보건학교실) ;
  • 김석현 (서울대학교 의과대학 산부인과학교실) ;
  • 궁미경 (성균관대학교 의과대학, 삼성제일병원 산부인과) ;
  • 전진현 (성균관대학교 의과대학, 삼성제일병원 산부인과) ;
  • 이영순 (서울대 수의과대학 공중보건학교실) ;
  • 강경선 (서울대 수의과대학 공중보건학교실)
  • Published : 2003.12.30
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Abstract

목 적: 본 실험의 목적은 자궁내막세포를 분리 및 배양법 확립과 함께 불멸화 시키는 것이다. 방 법: 자궁내막에서 상피세포(epithelial cells)와 기질세포(stromal cells)의 분리는 Satyawaroop 등(1979)의 방법에 기초를 두었다. 자궁내막에서 상피세포와 기질세포의 순수 분리도를 확인하고, 불멸화된 기질세포에서 SV40 large T antigen을 확인하기 위하여 면역형광 염색(immunocytochemistry)과 Western blot 기법을 이용하였다. 정상 기질세포의 경우 subconfluence (60%) 상태에서 transfection을 진행하였다. 순수 분리된 plasmid DNA와 Qiagen 사의 superfect를 이용하여 transfection을 실시하였다. 결 과: 본 연구에서 우리는 두 가지 형태의 자궁내막 세포의 분리 및 배양에 성공하였다. 상피세포는 다면체의 형태를 띠며, 선(grandular)조직의 조각으로부터 나선형으로 자란다.기질 세포는 길쭉한 형태를 띠며, 상피세포에 비해 오래 살고, 빠르게 증식하여 나란한 형태로 배열된 세포 다발(cell bundle)을 형성한다. 이렇게 분리된 세포들은 95%의 균질성을 보였으며, 면역형광염색과 western blot을 통해 확인 하였다. 한편 SV40(Simian Virus 40) large T 항원을 암호화 하고 있는 염기 서열을 포함한 플라스미드 벡터로 안정적인 트랜스펙션을 시킴으로써 불멸화 된 자궁내막의 기질 세포주를 확립하였다. 불멸화 된 세포는 그 세포가 유래한 정상의 세포와 동일한 표현형을 가지고 있었다. 결 론: 본 연구에서, 우리는 자궁내막에서 상피세포(epithelial cells)과 기질세포(stromal cells)를 분리하여 배양법을 확립하였다. 동시에 SV40 large T antigen을 이용하여 불멸화된 세포주를 확립하였다. 이렇게 확립된 세포주는 자궁의 생리작용 연구 및 자궁내막증(Endometriosis)과 자궁암(Endometrial cancer) 등과 같은 여러 자궁관련 질병 연구에 많은 도움이 될 것으로 사료된다.

Keywords

References

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