미생물학회지 (Korean Journal of Microbiology)

  • 제38권2호
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  • Pages.103-106
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  • 2002
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  • 0440-2413(pISSN)
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  • 2383-9902(eISSN)
한국미생물학회 (The Microbiological Society of Korea)
권호 표지

Aspergillus nidulans의 무성포자를 이용한 PCR 조건의 최적화

Optimization of PCR Condition with Conidiospore for Primary Screening of Aspergillus nidulans Transformants

  • 박희문 (충남대학교 자연과학대학 미생물학과) ;
  • 박범찬 (충남대학교 자연과학대학 미생물학과) ;
  • 박윤희 (충남대학교 자연과학대학 미생물학과) ;
  • 양소영 (충남대학교 자연과학대학 미생물학과)
  • 발행 : 2002.06.01
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초록

사상균류의 세포자체로부터 직접 PCR을 하는 방법은 세포벽 파괴의 어려움 때문에 모든 곰팡이에 적용될 수 없다. 극초단파 조사는 사상균류의 DNA를 추출함에 있어서 그 유용함이 이미 검중된 바 있는데, 본 논문에서는 극초단파 조사를 이용하여 Aspergillus nidulans의 포자로부터 손쉽게 주형 DNA를 얻어 PCR증폭하는 방법을 소개하고자 한다. 본 실험에서는 극초단파 조사시간과 PCR에 필요한 주형 DNA의 양 등을 최적화하였으며, 이렇게 수행된 PCR결과는 single copy유전자를 대상으로도 약 3 kb크기의 산물가지 증폭 가능하여, 형질전환체를 선별하기에 충분한 크기의 산물들도 효과적으로 얻어짐을 보여주었다. 따라서 이 방법은A. nidulans의 형질전환체를 보다 손쉽게, 시간을 절약하여 선별할 수 있는 효과적인 방법이라 생각된다.

Direct PCR from intact fungal cells is not readily suitable to all fungi mainly because of difficulties in rupturing the cell walls. Microwave irradiation has been proven to be useful in fungal DNA extraction protocol. Here we describe a fast template preparation method for PCR amplification from Aspefillus nidulans conidiospores using microwave irradiation. We optimized the duration far microwave irradiation, and the amount of template DNA for PCR. Amplification from samples prepared in this manner was so efficient that we could get PCR products with size enough to identify transformants. We believe that this is a time-saving procedure for screening true transformants of A. nidulans.

키워드

참고문헌

  1. Curr. Genet. v.24 Detection of gene-disruption events in Aspergillus transformants by polymerase chain reaction direct from conidiospores Aufauvre-Brown, A.;C.M. Tang;D.W. Holden https://doi.org/10.1007/BF00324683
  2. Nucleic Acids Res. v.19 A simple method for the isolation of chromosomal DNA from Gram positive or acid-fast bacteria Bollet, C.;M. Gevaudan;X. de Lamballerie;C. Zandotti;P. de Micco https://doi.org/10.1093/nar/19.8.1955
  3. Nucleic. Acids. Res. v.19 no.4006 Improved detection of HBV DNA by PCR after microwave treatment of serum Cheyrou, A.;C. Guyomarc'h;P. Jasserand;P. Blouin
  4. Biotechniques v.13 A quick and inexpensive method for removing polysaccharides from plant genomic DNA Fang, G.;S. Hammar;R. Grumet
  5. Fungal Genet. Newslett. v.43 PCR from fungal spores after microwave treatment Ferreira, A.V.B.;N. Glass
  6. Biotechniques v.15 Microwave miniprep of total genomic DNA from fungi, plants, protists and animals for PCR Goodwin, D.C.;S.B. Lee
  7. Nucleic Acid Res. v.17 no.4000 Direct clone characterization from plaques and colonies by the polymerase chain reaction Gussow, D.;T. Clackson
  8. J. Virol. Methods v.31 High quality DNA retrieved for Southern blot hybridization from microwave-fixed, paraffin-embedded liver tissues Hsu, H.C.;S.Y. Peng;C.T. Shun https://doi.org/10.1016/0166-0934(91)90163-T
  9. Biotechniques v.13 A simple and rapid method for screening transformant yeast colonies using PCR Liang, Q.;T. Richardson
  10. Fungal Genet. Newslett. v.42 Assessment of Magnaporthe grisea mating type by spore PCR Xu, J.R.;J.E. Hamer