Abstract
A serum-free media for CRIP/MFG-LacZ retrovirus production was developed and applied to continuous packed-bed culture system. The serum-free media developed by fractional factorial design contains indulin ($10\mug/mL$), transferrin ($5\mug/mL$), BSA (4 mg/mL), EGF (25 ng/mL), and linoleic acid ($10\mug/mL$). Operation of continuous packed-bed reactor using Fibra-cel enabled the packging cell to stably maintain retrovirus titer for about 1 week. The optimal operation conditions for dilution rate and temperature were 0.67(h(sup)-1) and $32^{circ}C$, respectively. Using this media, the retrovirus titer(cfu/mL) in the packed continuous culture was about 50% that of continuous culture with serum containing DMEM media.
본 연구에서는 레트로바이러스 생산 세포인 CRIP/LacZ 세포의 배양시에 혈청의 역할을 대체 할 수 있는 여러 첨가불을 선정하고 그 농도를 정하는 실험올 수행하여, 레트로바이러 스 생산을 워한 무혈청 배지를 개발하였다. 그 결과 DMEM 을 기본배지로 하고 insulin, transfenin, BSA, EGF and linoleic acid를 포함한 무혈청 배지를 개발하였다. 이를 충전 층 연속배양기흘 이용한 레트로바이러스의 연속생산 실험에 본 결과 $6-7\times10^4 cfu/ml$서 수율을 가진 레트로바이러스를 약 8일간 생산할 수 있었다. 충전층 연속반응기에서도 T -flask와 같이 온도의 영향이 매우 중요하였고 $32^{circ}C$, 에서 가 장 높은 수율회 레트로바이러스를 생산할 수 있었다. 이는 레트로바이러스외 온도에 따흔 비활성속도가 바이러스 생산 수율에 매우 큰 영향음 마칩을 시사해 주논 결과이다. 또한 충전층 배양기에서 무혈청배지를 이용한 세포배양 시에는 무혈청배지 첨가물로 서1포 부착 물짚에 대한 연구가 필요하다고 생각된다.