Abstract
The flavonoid biosynthetic pathway has been studied as a genetic model system, particularly in Petunia hybrida. In order to study the flavonoid biosynthetic pathway, we constructed a fusion gene system between Cauliflower Mosaic Virus (CaMV) 35S promoter and eggplant flavonoid 3', 5'-hydroxylase in pBI 121 plasmid. An optimal condition for plant regeneration was observed when internode explants were cultured on MS medium supplemented with IAA 0.2 mg/L plus BA 3 mg/L. For plant transformation internode explants of Petunia hybrida were precultured on BM medium supplemented with IAA 0.2 mg/L plus BA 3 mg/L. Putative transgenic plants were selected on medium containing kanamycin 50 mg/L plus cefotaxim 300 mg/L. Putative selected transformants were confirmed by amplification of selectable marker gene (nptII) by polymerase chain reaction (PCR) and Southern hybridization of flavonoid 3',5'-hydroxylase gene.
페튜니아에서의 안토시아닌 생합성 경로는 하나의 중요한 유전적인 모델시스템으로 연구되어 왔다. 본 연구에서는 이 경로에 대한 유전자를 연구하기 위하여 CaMV 35S promoter와 가지로부터 분리된 flavonoid 3',5'-hydroxylase cDNA를 pBI121 플라스미드에서 fusion gene 시스템을 만들었다. 형질전환된 페튜니아를 얻기 위한 최적조건이 페튜니아 절간을 IAA 0.2 ㎎/mL, BA 3 ㎎/mL를 혼용한 MS배지에서 얻었다. 효과적인 형질전환을 위하여 페튜니아 절간을 IAA 0.2㎎/L BA 3㎎/L를 혼용한 BM배지에서 Agrobacterium tumefaciens를 접종하기 전에 절편체를 preculture하였다 형질전환체는 50㎎/L kanamycin과 cefotaxim 300㎎/L을 포함하는 배지에서 선발하였다. PCR과 Southern hybridization분석에 의하여 형질전환체를 검증하였다.