Production of Polyclonal Antibodies Specific to Porcine Adipocyte Plasma Membrane Proteins in Sheep

면양을 이용한 돼지 지방제포 원형질막 단백질 특이 항체의 생산

The objectives of this study were to produce polyclonal antibody to adipocyte plasma membrane (APM) proteins isolated from pig, and to investigate its tissue specificity. Plasma membrane proteins from adipocyte, brain, heart, kidney, liver and spleen were isolated using a self-forming Percoll gradient. Sheep (40kg) was immunized three times at three week interval with the purified APM proteins. Blood was taken from non-immunized sheep (NS) and from immunized sheep at 10 (AS-1), 12 (AS-2), and 14 (AS-3) days after the third immunization. Antisera titers and cross-reactivity against other tissues were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Antisera reacted strongly to APM proteins showing detectable amounts of antibody at 1：81,000 dilution. And antisera showed much stronger reactivity to APM proteins than any other tissue plasma membrane proteins. Furthermore, tissue specificity of antisera against APM was reconfirmed by immunoblotting using anti-sheep immunoglobulin G-horseradish peroxidase conjugate as a secondary antibody Antisera to APM proteins showed adipocyte specificity compared with other tissues. In conclusion, polyclonal antibody against APM proteins isolated from pig was developed successfully in our laboratory, and these antisera showed tissue specificity with APM.

본 연구는 돼지 지방세포 원형질막 단백질에 대한 항체를 면양에서 생산하고 생산된 항체의 역가 및 조직특이성을 조사하기 위하여 실시되었다. 지방세포, 뇌, 심장, 신장, 간장 및 비장으로부터 원형질막 단백질을 추출하였으며, 그중 지방세포로부터 분리한 원형질막 단백질을 면양(체중 40kg)에 3주 간격으로 3회 면역 접종시켰다. 면역접종 전, 3차 면역접종 후 10일 (AS-1), 12일 (AS-2)및 14일 (AS-3)째에 각각 면양의 경정맥으로부터 혈액을 채취하여 혈청을 분리하였다. 항체의 역가 및 기타 조직과의 교차반응성은 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)로 측정하였다. 면양에서 생산된 돼지 지방세포 원형질막 단백질에 대한 항혈청은 지방세포 원형질막 단백질과 강한 항원-항체 반응을 나타내었다. 항혈청의 교차반응성을 조사한 결과, 기타 조직의 원형질막 단백질과는 매우 미약한 반응을 나타낸 반면 지방세포 원형질막 단백질과는 강한 반응을 나타내었다. 이러한 항혈청의 지방세포 원형질막 단백질과의 조직특이적인 반응은 anti-sheep immunoglobulin G-horseradish peroxidase conjugate를 2차 항체로 이용한 immunoblot에 의해서도 재확인되었다. 이상의 결과, 면양으로부터 생산된 돼지 지방세포 원형질막 단백질에 대한 항체는 높은 역가를 지니고 있었으며, 지방세포 원형질막 단백질에 특이적으로 작용함을 알 수 있었다.