Abstract
This study was performed to clarify various conditions on the test of lipoxygenase-l and to establish the application of new test method for varietal improvement of soybeans in order to decrease beany flavors. Potassium borate and Tris were used as buffer and O.1M potassium borate solution showed the best result for the lipoxygenase-l test. In the range of pH 8.5~9.0 of the buffer, 2mM linoleic acid as substrate was effective. For color development, 100$\mu$l of two solutions(KI and starch) were added to the half soybean seed, successively. The substrate solution included linoleic acid was stored safely for 10 days at 4$^{\circ}C$ in refrigerator and for 4 days at room temperature. The best result was as follows; the 1ml of substrate solution[0.1M potassium borate(pH 9.0), 0.1％ Tween-20, 2mM linoleic acid] was added to the chipped half soybean seed in l.5ml plastic tube, waited for 15 minutes, and 100$\mu$l of color development solutions(5％ saturated KI in 15％ acetic acid, 1％ starch) were added to the tube, successively. After 4 hours, the purple color was observed in the upper phase of the plastic tube in the presence of lipoxygenase-1 and milky color in absence of lipoxygenase-1. The purple color was stable from 4 to 24 hours. There was no interfering effect by lipoxygenase-2 and -3. The plastic tube should be placed in the tube stand without shaking during the lipoxygenase-l test.
본 실험은 lipoxygenase-1 효소 검정을 위한 관련요인 구명과 새로운 검정방법의 활용성을 확립함으로써 무두취 콩품종 육성사업에 도움이 될 수 있는 자료를 얻고저 수행되었다. 1. 기질용액의 완충제로서 Tris나 potassium borate가 효과적이었고 그중 0.1M potassium brate가 lipoxygenase-1의 검정에 있어 가장 효과적이었으며 적정 pH의 범위는 pH 8.5~9.0 이었다. 2. 기질인 linoleic acid의 적정 농도는 2mM이었고 기질용액은 4$^{\circ}C$ 냉장고에서 10일 정도 실온상태에서 4일 정도까지 안전하게 보관하면서 사용할 수 있었다. 3. 콩 종실의 lipoxygenase-1 유무 여부의 확인을 위한 가장 적당한 검정방법은 종피와 배가 제거되고 얇게 자른 반립의 종자를 1.5ml크기의 plastic tube에 넣고 기질용액(0.1M potassium borate (pH 9.0), 0.1% Tween-20, 2mM linoleic acid)을 1ml 첨가해 주고 15분 경과 후 포화된 KI 용액이 5% 함유된 15% acetic acid와 1% 전분용액을 각각 100$\mu$l씩 첨가한 뒤 4시간 후에 상층액의 발색반응을 관찰하는 것으로 판명 되었다. 4. Lipoxygenase-1이 존재하는 종실의 상층액에서는 보라색 발색반응을 보였고 lipoxygenase-1이 결핍된 종실의 상층액에서는 우유빛이 나타났으며 lipoxygenase-2와 3의 간섭효과는 없었다. 보라색 발색은 4시간부터 24시간까지 안정하였고 발색용액(KI와 starch)첨가한 뒤에는 plastic tube를 흔들림없이 유지시켜야 했다.
