Effect of Nuclear Transfer Methods on In Vitro Development of Reconstituted Bovine Embryos II. Effect of Electric Voltage and In Vitro Produced Donor Embryo Quality on Fusion and In Vitro Development

소에서 핵이식 방법이 재구축배의 체외발달에 미치는 영향 II. 통전전압과 체내생산 공핵배의 질에 따른 융합과 체외발달

This study was conducted to determine the optimal DC voltage for NT of in vivo donor embryo nuclei and investigate the effect of donor embryo guality on fusion and in vitro development of NT embryos . Recpient oocytes were enucleated 25~27h after IVM and further cuitured for 18~20h prior to fusion for oocyte aging. Donor embryos of molura stage were recovered from superovulated heifers and classified l into good and low quality group. Their nuclei were transferred in to the emucleated oocytes 42~44h post-IVM and fused 43-45h post-IVM with a single 0.75kV /cm or 1.0kV /cm DC voltage for 70${\mu}\textrm{A}$sec. The fusion rate of oocytes was not different between two DC voltages. However, the cleavage and M + B developmnent was more high at 1.0kV /cm DC voltage and the proportion of M+B was 19.0% at 0.75kV /cm DC and 29.4% at 1.0kV /cm DC voltage. Donor embryo qualtiy did not greatly affect the fusion and cleavage of NT oocytes, but none of NT embryos derived from low embryo quatity reached the morula stage. The results indicate that the most suitable DC v voltage for electrofusion of in vivo donor muclei was a single 1.0kV /cm DC voltage and donor embryo quality was an important factor affecting the development in vitro of NT embryos.

본 연구는 체내생산 공핵배 핵이식의 최적 통전전압을 결정하기 위하여 그리고 공핵배의 질이 핵이식난자의 융합과 체외발달에 미치는 영향을 조사하기 위하여 수행되었다. 수핵난자는 체외성숙후 25∼27시간에 제핵하였고 난자의 추가성숙을 위해서 융합전에 18∼20시간 더 배양하였다. 상실배시기의 공핵배는 다배란 처녀우에서 채란한 후 질에 따라 양질과 저질로 구분하여 공시하였다. 공핵배의 핵이식은 체외성숙후 42∼44시간에 행하였고, 융합은 0.75kV/cm 또는 1.0kV/cm DC 전압으로 체외성숙 후 43∼45시간에 실시하였다. 융합율은 두 전안갑에 차이가 없었으나 난할율과 M＋B 발달율은 19.0%와 29.4%였다. 공핵배의 질은 융합율과 난할율에 크게 영향이 없었으나 저질공핵배의 핵이식으로 부터는 상실배의 발달이 없었다. 본 결과에서 체내생산 공핵배 핵이식의 최적전압은 1.0kV/cm DC이었으며 공핵배의 질은 핵이식배 발달에 영향하는 중요 요인 중에 하나이었다.