ELISA방법에 의한 방사선 피폭 후 흰쥐 혈액 내에서의 ceruloplasmin 정량

Quantification of Ceruloplasmin in Wale Rats Exposed to ${\gamma}$-radiation by Enzyme Linked Immunosorbent Assay

수놈 흰쥐를 1.0, 2.0, 3.0, 5.0 및 7.0 Gy 선량으로 전신 조사하였으며 조사 후 48, 72, 96시간과 216시간 경과 후 혈액을 채취하였다. 혈액 내 ceruloplasmin을 측정하여 선량반응곡선을 완성하기 위하여 항원고정 방식의 경쟁적 효소면역측정법을 사용하였다. Ceruloplasmin의 정제는 turpentine을 주사한 수놈 흰쥐의 혈액을 사용하였다. Ceruloplasmin의 흡착효율은 50 mM carbonate/bicarbonate buffer, pH 9.6보다 10 mM Tris-HCI, 150 mM sodium chloride, pH 7.4에서 더 효과적이었으며 정량을 위한 적정한 ceruleplasmin의 흡착범위는 well 당 $70{\sim}140ng$이었다. Ceruloplasmin은 피폭 후 $72{\sim}96$시간에서 최대농도를 보였으며 피폭 후 96시간에서 최대값을 지니는 선량반응관계를 보였다. Cerulplasmin은 피폭 후 216시간에서도 피폭이전의 농도로 회복되지 않았다. 0.1 Gy로 피폭된 경우에도 ceruloplasmin의 농도는 피폭 후 $72{\sim}96$시간에서 최대로 증가하였으며 단백질의 농도는 대조군과 유의성 있는 변화를 관찰할 수 있었다. Cerulplasmin은 방사선피폭 후 변화하는 중요한 급성반응물질중의 하나로 밝혀졌으며 방사선방호를 위한 유전자 발현 및 조절에 관할 연구가 필요하다.

Adult male rats were exposed to a whole body with a single dose of 1.0, 2.0, 3.0, 5.0, and 7.0 Gy. The animals were sacrificed 48, 72, 96 and 216 hours following exposure. A competitive enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) with antigen immobilized on the solid phase has been developed to measure ceruloplasmin in rat serum and complete dose response curves. Ceruloplasmin was purified from the plasma of turpentine treated male rats. Coating of ceruloplasmin had more effectiveness in 10 mM Tris-HCI, 150 mM sodium chloride, pH 7.4 than in 50 mM carbonate/bicarbonate buffer, pH 9.6. The coating range for ceruloplasmin was $70{\sim}140ng$/well. Levels of ceruloplasmin increased to maximum on the $72{\sim}96$ hours after irradiation. Slope of between response and dose was greatest value 96 hours following irradiation. Normal ceruloplasmin levels were not recorded 216 hours following exposure. In 0.1 Gy irradiated group, levels of ceruloplasmin also increased to maximum on the $72{\sim}96$ hours following irradiation. The concentration of this protein remained significantly different from control value, 196 hours after exposure. Ceruloplasmin was identified as one of the major acute phase protein following irradiation and further studies about gene expression and regulation would be necessary for radiation protection.