MCAT1의 돌연변이체가 Arginine 통과 능력에 미치는 영향

Effect on the Arginine Transport of Mutant MCAT1, Mouse Cationic Aminoacid Transporter

MCAT1 의 기질과 결합하는 장소를 조사하기 위해 세포막내에 존재하는 부분의 극성 아미노산을 반대 극성의 아미노산으로 치환시킨 돌연변이체를 만들어 arginine 통과능력, gp70 결합능, efflux, Xenopus oocyte 를 이용한 단백질 발현 능력등을 조사하였다. 다섯 개의 돌연변이체중 D403K 이 가장 흥미로운 성질을 나타냈는데, 그것은 정상적인 gp70 결합능력과 낮은 arginine 통과능력을 나타냈다는 것으로 정상적인 단백질이 세포막에서 발현되고 있으나 arginine 통과능력이 감소했다는 사실을 나타내는 것이다. K211E 를 제외한 모든 돌연변이체가 감소된 arginine efflux 와 감소된 Vmax 값을 나타내었다. 이들 결과로부터 MCAT1 의 403 번째 아미노산인 glutamic acid 가 세포막내에서 기질과 상호작용하는 장소라는 가능성을 시사하였다.

To find the substrate interacting site of the MCAT1, charged amino acid residues in the transmembrane domain were changed to opposite charged amino acids and studied the arginine uptake, gp70 binding, efflux and protein expression using the Xenopus oocyte expression method. Among the five mutants of MCAT1, the D403K showed the most interesting characteristics, which had normal gp70 binding but low arginine uptake function, that means the normal expression on the membrane but decreased transport function. All mutants except K211E showed decreased arginine efflux, and kinetic study showed decreased Vmax. Together, Clu(403) residue of MCAT1 may show the possible substrate interacting site in the transmembrane domain of MCAT1.