Tuberculosis and Respiratory Diseases
- 제43권1호
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- Pages.30-37
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- 1996
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- 1738-3536(pISSN)
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- 2005-6184(eISSN)
결핵균 PCR에서 이온교환수지를 이용한 신속한 DNA 분리
Rapid Extraction of DNA using Ion Exchange Resin for Early Detection of Mycobacterium tuberculosis by the Polymerase Chain Reaction
- 김철민 (부산대학교병원 의학연구소) ;
- 박승규 (부산대학교병원 의학연구소) ;
- 손말현 (부산대학교병원 의학연구소) ;
- 송선대 (부산대학교병원 의학연구소) ;
- 김영 (국립 마산결핵병원 영상연구소, 병리과) ;
- 전은숙 (부산대학교 의과대학 임상병리과학교실) ;
- 손한철 (부산대학교 의과대학 임상병리과학교실) ;
- 정병선 (부산대학교 의과대학 생화학과학교실)
- Kim, Cheol-Min (Medical Institute, Pusan National University Hospital) ;
- Park, Seung-Kyu (Medical Institute, Pusan National University Hospital) ;
- Shon, Mal-Hyun (Medical Institute, Pusan National University Hospital) ;
- Song, Sun-Dae (Medical Institute, Pusan National University Hospital) ;
- Kim, Young (Institute of Clinical Research, and Pathology, Medical Institute, Pusan National University Hospital) ;
- Jun, Eun-Sook (Department of Clinical Pathology, Medical College, Pusan National University) ;
- Son, Han-Chul (Department of Clinical Pathology, Medical College, Pusan National University) ;
- Jung, Byung-Sun (Department of Biochemistry, Medical College, Pusan National University)
- 발행 : 1996.02.29
초록
연구배경: 본 연구는 결핵의 조기검출을 위하여, PCR을 이용하는데 있어서의 중요한 문제점의 하나인 임상검체로부터 결핵균을 분리 방법을 개선하여, 교차오염의 가능성을 최소화하고 PCR에 의한 결핵균의 DNA검출을 보다 쉽고 안전하게 실시하여 대량의 검체를 처리해야하는 일상 임상검사법으로 정착시키고자 하는데 그 목적이 있다. 방법: 다양한 방법으로 DNA를 검출하여 동일한 방법으로 PCR을 수행하여 이차 PCR 산물의 전기영동 결과를 AFB도말 및 배양검사 결과와 함께 비교하여 감수성, 특이성, 양성예측도 및 음성예측도의 항목으로 비교분석하였다. 실험 1은 Proteinase K 처리후 phenol로 추출하는 방법과 Chelex 100 이온교환 수지를 이용한 InstaGene법을 100예에서 비교하였으며, 실험 2에서는 Microwave 처리후 원침 상청액을 직접 시용하는 방법과 Chelex 100 이온교환 수지를 이용한 InstaGene 법을 98예에서 비교하였다. 결과: 세 DNA 분리법으로 실시한 PCR결과에서 모두 특이성과 양성예측도가 매우 낮았다. 실험 1에서 Proteinase K 법에 의한 경우 보다 Insta Gene을 이용한 경우에 약 20% 높은 감수성과 10%~20% 높은 음성예측도를 보이고 있으며, 특이성은 2%~8% 낮고, 양성예측도는 2.5%~4% 높은 것으로 나타났다. 실험 2에서는 Microwave법과 Insta Gene을 이용한 경우에 거의 비슷한 결과를 보였다. 결론: 결핵진단시 PCR을 위한 객담검체에서의 DNA 분리시에 Microwave법과
Background: The extraction methods of DNA from clinical samples are the major obstacle to use the PCR(polymerase Chain Reaction) in routine labortary for early detection of M. tuberculosis. We tried to improve the extraction method of DNA from sputum for establishment of the PCR in routine labortary by reducing the possibility of cross contamination and performing it easily and safely. Methods: We used the