Development of One-Step Immuno-Chromatography Assay System for Salmonella typhimurium

Immuno-Chromatography 방법을 이용한 식중독균(Salmonella typhimurium) 1단계 분석시스템의 개발

One-step immuno-chromatography assay system for heat-killed Salmonella typhimurium antigens was developed. Three major components used were a glass fiber membrane (placed at the bottom of the system) with an antibody (specific to the analyse, detection antibody)-gold conjugate deposited in a dry state on the surface, a nitrocellulose membrane (middle) with an antibody (also, specific to the analyse but recognized different epitome: capture antibody) and anti-detection antibody immobilized in spatially separated areas, and a cellulose membrane (top) as absorption pad. These membranes were partially superimposed such that a wicking of aqueous solution containing sample can continuously take place through membranes. Variables that affected the system performance were the concentration of capture antibody, the location on the membrane, inert protein used for blocking of the membrane and for carrying the sample, and the concentration of the gold conjugate. Under optimal conditions, within 15 minutes after absorption of a sample solution from the bottom of the system antigen-antibody complexes of sandwich type were formed on the membrane surface area with immobilized capture antibody and a color signal was generated in proportion to the analyse concentration. The minimum do tection limit of the analyse was $1{\times}106$ Salmonella cells/mL.

열처리된 Salmonella typhimurium 항원을 모델 분석물질로 선택하여 단지 시료만을 첨가함으로써 측정을 수행할 수 있는 1단계 immuno--chromatogra phy 분석시스템이 개발되었다. 개발된 시스템은 분 석물질 특정항체(감지항체)-gold 중합체가 건조된 상태로 축적된 glass fiber membrane(하단), 분석 물질의 다른 epltope를 인지하는 항체(포획항체)와 항 감지항체 특정항체들이 공간적으로 분리되어 고정화된 nitrocellulose membrane(중단) 그리고 흡수대로 선택된 cellulose membrane ( 상단)들로 구성된다. 이와 같은 구성성분들은 분석물질을 포함한 시료수용액이 모세관현상에 의해 연속적으로 이동되도록 부분척으로 포개어 배열되었다. 분석시스템의 성능을 조절하는 변수들은 포획항체의 농도 및 membrane 상의 고정화 위치, membrane 표면처리 와 시료운반용액에 샤용된 비반응성 단백질의 종류, 그리고 중합체의 농도로써 확인되었다. 최적조건하 에서, 시스템의 하부로부터 시료수용액을 흡수 후 15분 이내에 포획항체가 고정화된 membrane 상의 지역에 샌드위치 형상의 항원 항체 면역결합체가 형성되었고 이로부터 발생된 발색신호는 분석물질의 농도에 비례하는 것으로 나타났다. 분석물질의 측정 하한농도는 $1{\times}106$ Salmonella cells/mL인 것으로 나타났다.