Crystallization and Preliminary X-ray diffraction Studies of Salmonella typhimurium Deoxy-Thymidine Diphosphate-D-Glucose-4, 6-Dehydratase

Salmonella typhimurium의 Deoxy-Thymidine Diphosphate-D-Glucose-4, 6-Dehydratase의 결정화와 X-선 회절에 관한 연구

Single crystals of deoxy-thymidine diphosphate-D-gluxose-4,6-dehydratase(abbreviated as dTDP-D-glucose dehydratase) from Escherichia coli Strain BL21 clone which harbors the gene of dTDP-D-glucose dehydratase in Salmonella typhimurium LT2 have been grown with and whithout substrates by sitting drop vapor diffusion at room temperature. The precipitating agent was 1.6 to 2.0 M Na, K phosphate buffer(pH 8.0). The crystals diffract to at least 2.5Å and belong to the hexagonal space group P61 with cell dimensions a=b=168.54Å, c=81.08Å. The asymmetric unit contains one dimer with a crystal volume per protein mass(VM) of 2.4Å3/Da and solvent content (Vsol) of 64% by volume.

Salmonella typhimurium LT2에서 deoxy-thymidine diphosphate-D-gluxose-4,6-dehydratase의 유전자를 재조합한 Escherichia coli BL21 clone으로부터 dTDP-D-glucose dehydratase를 분리 정제한 후, 이 효소의 단결정을 상온에서 sitting drop 기체확산법으로 성장시켰다. 결정은 효소에 기질이 포함되어 있는 것과 포함되어 있지 않는 것 모두가 얻어지며, 이 때 침전제는 1.6-2.0 M Na, K 인산 완충용액(pH 8.0)을 사용하였다. 이 단결정은 최소 2.5Å의 분해능으로 회절하였으며, 공간군은 hexagonal한 P61이고, 격자의 크기는 a=b=168.54Å, c=81.08Å이었다. Asymmetric unit에는 이량체 한분자를 포함하고 있으며 단백질 질량당 결정의 부피는 VM=2.4Å3/Da, 용매의 함유율은 부피를 기준으로 64%였다.