DNA 입자총에 의한 Cymbidium속 난의 형질전환 조건 검토

Optimization of Cymbidium transformation system by the particle gun techniques

Cymbidium속 난의 형질전환계를 확립하기 위해서, microprojectile bombardment 방법을 이용하여 춘란(Cymbidium virescence)의 rhizome 조직세포에 외래 유전자를 도입하는 조건을 검토하였다. 각 parameter별 적정조건으로서 텅스텐 입자의 크기는 $1.11\;{\mu}m$, He 가스 압력은 $77.33kg/cm^2$, gap distance는 6.35mm, target distance는 7.0cm 이었다. DNA피복입자를 투사한 $400{\mu}m$ 두께의 rhizome 절편을 2개월간 배양한 뒤 GUS 활성을 조사한 결과 이 유전자가 발현되는 세포들이 관찰되었다. Kanamycin (100 mg/L)을 첨가한 배지에서 6개월 동안 선택배양을 통해 얻은 rhizome의 DNA를 PCR로 분석한 결과 nptII 유전자의 삽입을 확인할 수 있었다.

Process of particle bombardment for efficient transformation of Cymbidium virescence rhizome microcross sections was investigated using Biolistic particle delivery system with pBI121 harboring the ${\beta}-glucuronidase$(GUS) and the neomycin phosphotransferaseII(nptII). The best result was obtained from the combination of $1.11{\;}{\mu}m$ tungsten particles coated with pBl121, $77.33kg/cm^2$ helium pressure, 6.35 mm gap distance, and 7.0 cm target distance. Transient expression of the reporter gene, GUS, bombarded into the rhizome microsections was observed by the histochemical assay. The marker gene, nptII, delivered by bombarding the tungsten particles coated with the plasmid DNA was identified in the transformed rhizome by polymerase chain reaction.