흰쥐의 연령과 감염과정에 따른 폐포자충에 대한 항체형성 양상

Immunoblot analysis for serum antibodies to Pneumocystis carinii by age and intensity of infection in rats

정상 흰쥐의 출생 후 연령과 면역억제된 흰쥐의 감염강도에 따른 혈청 내 폐포자충(Pneumocystis carinii)에 대한 항체 형성을 관찰하고자 이 연구를 수행하였다. 폐포자충을 발현시키고 순수분리하여 수용성 항원을 만들고 이를 이용하여 전기영동과 면역이적법(Immunoblot)과 효소면역법(ELISA)을 시행하여 항체반응을 관찰하였다. SDS-PAGE에 의하여 분리된 항원의 단백 질 분획은 20-200 kDa의 범위에서 20개 이상이 관찰되었다. 이들 분획 중에서 인체 양성표준 혈청에 116 kDa 분획이 강하게, 45-55 kDa 및 100 kDa 분획이 약하게 반응하였고, 흰쥐 양성표준 혈청과는 40-45 kDa 분회과 강하게 그리고 50-55 kDa, 116, 200 kDa 분획과 약하게 반응하였다. 연령 별로 이 네 분획과의 반응을 보면 출생 5일-6주까지 양성률 50-100%이고 8주에는 0% 가 되었고, 10주 이후에는 증가하여 40주에 100%가 되었다. 폐포자충의 감염량이 증가하여 감염 강도가 IV인 흰쥐에서는 면역이적으로 측정할만큼 항체를 가진 개체가 없었다. 이러한 정상과 면역 억제된 흰쥐의 혈청반응 유형은 효소면역법에서도 확인할 수 있었다. 네 항원 분획 중 40-45 kDa에 대한 혈청반응이 각 군에서 낮게 관찰되었으나 그 생물학적 의의는 아직 평가하기 어렵다. 이 결과는 흰쥐가 출생하면 모체에서 유래한 혈청 내 항폐포자충 항체를 8주가 경과하면서 모두 소실하고 그 이후에 10주부터 40주에 이르기까지 자연감염에 의해 항체를 서서히 형성하는 것을 의미한다. 면역 억제에 의하여 흰쥐가 항체를 효과적으로 생산하지 못하게 되면 혈청 내 항체량에 반비례하여 폐포자충의 감염량이 늘어난다. 이는 항체에 의해 매개되는 체액면역이 폐포자충의 감염과 직접 관련이 있다는 증거가 된다.

The present study aims to observe changing patterns of serum antibody to hleumuvstis calinii in normal rats of different ages and in immunosuppressed rats. The serum IgG antibody was observed by immunoblotting with crude antigen of f carinii which were purified from the lungs of infected rats. The crude antigens separated in SDS-PAGE resolved more than 20 protein bands from 20 to 200 kDa. Of them,40-45, 50-55, 116 and 200 kDa bands were major antigens of R cori.nii. Most of the normal rats of up to 4 weeks had the antibodies reacting the 4 bands, but none of 8-week-old rats revealed the specific antibody. After the rats grew for 40 weeks, all were found to have the antibody in their serum. Same pattern of serum antibody level by age was found in ELISA. When immunosuppressed rats became heavily infected, the antibody in their serum decreased distinctively. The present results suggest that antibodies in normal newborn rats are transferred from their mother and lowered up to 8 weeks. Thereafter, the levels of the antibodies begin to increase by natural exposure to R cnrinii. It was also confirmed that the intensity of P cnrinii infection is inversely related with levels of serum antibodies.