Localization of actin and myosin in Cryptosporidium parvum using immunogold staining

작은와포자충에서 면역황금염색법을 이용한 actin과 myosin의 위치 관찰

The location of actin and myosin of the several stages of Cwptosporinium parvum was observed. The tissue antigen of C. pcruum was prepared through immunosuppression of IgG mice with Depomedrol . The thin sectioned specimens, which were incubated with the IgG fraction of the rabbit polyclonal antibodies raised against chicken back muscle actin and bovine uterus myosin, were treated with 10 nm gold-conjugated goat anti-rabbit IgG, Electrodense particles were located mainly on the pellicles of all observed developmental stages of the parasites. The number of actin gold particles in the cytoplasm increased when the parasite was dividing actively as in case of meronts. Especially in macrogametocytes, a lot of actin and myosin particles were synthesized and storaged as amilopectin-like bodies. There were many actin gold particles along the microspikes of cytoplasmic membranes in various developmental stages. The actin and myosin observed in this study may play important roles to control the shape of the parasites and movement of cytoplasmic membranes as cvtoskeletal proteins.

Cyptosporidium parvum의 발달 단계별 actin과 myosin의 분포 위치를 면역황금염색법을 이용하여 관찰하였다. $Depomedrol^{\circledR}$을 ICR마우스에 피하주사하여 면역억제시킨 후 C. parvum이 발현된 마우스 회장을 잘라 LR gold로 포매하여 초박절편을 떴다. 일차항체로는 chickenbackmuscle actin과 bovine uterus myosin에 대한 rabbit polyclonal antibody를 사용하였고 이차항체로는 10 mm 크기의 황금입자가 결합된 goatanti-rabbit lgG를 반응시켰다 Uranylacetate와 leadcitrate로 염색한 후 투과전자현미경으로 관찰하였다 Trophozoite에서는 세포막에서 주로 actin과 myosin이 관찰되었고 feederorganelle 주위 세포질에는 actin이 분포하였다. Meront와 같이 활발히 분열하고 있는 단계에서는 세포막과 세포질 전체에 actin이 분포되어있었으며 myosin은 세포막에서만 소량 관찰되었다. 핵과 anlage of rhoptries 등은 두 단백질에 모두 염색되지 않았다. Macrogametocyte 에서는 amylopectin-lile bodies에서 actin과 myosin이 모두 관찰되었으나 wall forming bodies에서는 관찰되지 않았고 feederorganelle 주위 세포질 부분에서는 actin이 관찰되었다. Sporozoite를 포함하는 oocyst와 merozoite를 포함하는 meront에서는 세포막과 세포막사이에서 actin이 다수 관찰 되었으며 myosin은 소량 관찰되었다. Merozoites가 빠져나가 속이 비어있는 parasitophorous vacuole중에는 microspike를 형성한 것들이 종종 관찰되었고 이것이 좀더 길어져 마치 microvilli와 같이 보이는 경우도 있었으며 이러한 구조물에서도 actin이 다수 관찰되었다. 이상의 결과로 미루어 actin과 myosin은 세포막에 주로 분포하면서 C. parvum의 형태를 유지시키며 또한 세포막의 움직임을 조절하는 cytoskeletalproteiA으로서의 역할이 주된 작용일 것으로 생각되었다.