Studies on the Interspecific and Intergeneric Hybridization in Herbage Graasses III. Isolation and culture of protoplasts from cultured cells of Italian ryegass (Lolium multiflorum Lam.)

화본과 목초의 종.속간 잡종에 관한 연구 III. 이탈리안 라이그라스의 배양세포로부터 원형질체의 분리와 배양

The yield, viability and continuous culture of isolated Italian ryegrass protoplasts were investigated. The effects of cold treatment (4^{\circ}C.$) for 7 days and basic LS medium supplemented with 5mg/l $AgNO_3$ showed effectively on embryogenic callus induction and regeneration responses of immature and mature embryos or young inflorescences subcultured every 4 weeks on basic medium. The optimum combinations of growth regulator on the regeneration responses was 0.2mg/l BAP and 2mg/l 2, 4-D. Calli induced inflorescences were suspended in its liquid medium for 5 days before enzyme treatment. Maximum protoplast yield and viability were obtained after digestion in enzyme solution contained 4% cellulase R10. 2% macerozyme and 2% pectinase in 0.6M mannitol. Cell division and microcalli development were observed in isolated protoplasts cultured in agarose culture of KM8P medium.

이탈리안 라이그라수(Lolium muliflorum Lam.)의 원형질체 분리 및 생존성에 영향을 미치는 몇가지 요인들에 대하여 조사한 바 다음과 같은 결과를 얻었다. 성숙배. 미숙배 및 유종에 있어서 분화력이 높이 캘러스 유기는 4^{\circ}C.$에서 7일간 저온처리와 기본배지에 $AgNO_3$ 5mg/을 첨가한 것이 효과적이었다. 캘러스로부터의 재분화는 BAP 0.2mg/l와 2,4-D 2mg/l의 조합에서 가장 좋았다. 유종에서 유기되 현탁배양 세포를 액체배지에서 5일 간 진탕배양한 후 효소(4% cellulase R10, 2% macerozyme, 2% pectinase)와 삼투압 조절제인 0.6M mannitol을 첨가한 용액에서 생존율이 높은 원형질체를 얻었다. 그리고원형질체는 KM8P배지의 agarose 고체배지에서 헤포분열과 미세포괴가 이루어졌다.