Long-term Preservation of Bombyx mori Stocks by Frozen Gonad Storage

생식소 동결에 의한 누에 유전자원의 장기보존

For a long-term preservation of silkworm stocks by frozen gonad storage, fundamental topics such as freezing rate and transplanting stage of the gonad, proper cryoprotectant, and super-cooling temperature and freezing point of the freezing medium were examined and following results were obtained. Proper method to anesthetize the ovary-recipient silkworm was to dip the animal to cold water for 10 minutes, and the ovary taken from the 4th instar larvae was more suitable for freezing-preservation than that from the 5th. Concerning the cryoprotectant, glycerol and DMSO were effective to prevent cryoinjury of the ovary, but sorbitol was not. The supercooling temperature and freezing point of the medium to freeze the ovary and testes were checked, and consulting with the results desirable cooling rate was confirmed. On the desirable conditions of transplanting methods, freezing rate and cryoprotectant concentration ect., the next generation was obtained when the females implanted frozen-thawed ovaries mated with normal males, but none of the normal females mated with the males implanted frozen-thawed testes laid fertilized eggs. Now it is needed to improve the connecting ration of the ducts associated with the transplanted testis to those of the hosts.

생식소동결로 누에 유전자원을 장기보존하기 위하여 생식소의 생식방법, 최적 동결속도 및 동해방지제, 동결매액의 과냉거점과 빙점, 생식소 동결시기 등, 생식소의 동결보존에 필요한 기초자료를 검토하여 다음의 결과를 얻었다. 1. 생식소 피다식 누에의 마취에 적합한 방법은 에칠에텔, 냉수침지, 저온접촉, 탄산가스 접촉 중 냉수에 10분간 침지처리하는 것이었다. 2. 누에난소를 동결함에 있어 그리세롤과 DMSO는 우수한 동결방지 효과를 보였으나 솔비톨은 부적합하였다. 3. 9-15%의 그리세롤을 첨가한 동결매액의 과냉거점과 빙점을 조사하여 잠열발생량을 2.0-4.5$^{\circ}C$로 억제할 수 있는 동결속도를 확인하였다. 4. 5령보다 4령누에에 난소를 이식하는 것이 난소생존 및 완성난형성 면에서 1.3-1.4배 유리하였다. 5. 동결난소를 이식받은 암나방을 수나방과 교미시켜 수정란을 얻었으며, 유전형질검정으로 이 수정난에서 발생한 차세대 누에가 동결난소에서 유래한 것임을 확인하였다. 6. 4령 또는 5령기에 동겨정소를 이식한 수나방과 교미한 정상 암나방 중 수정난을 산란한 것은 없었다.