In Vitro Fertilization and Embryo Culture in Immature Rats induced to Superovulate

미성숙 흰쥐에 있어서 과잉배란 난자의 체외수정 및 수정란의 배양에 관한 연구

The ability of fertilization in vitro and subsequent development of superovulated oocytes was assessed in a controlled environment using an in vitro fertilization technique. The in vitro fertilization percentage of oocytes with cumulus mass declined significantly(P<0.05) with increased doses from 4~10 to 16~40IU of PMSG for superovulation. However, the porportion of polyspermic penetration varied from 2.3 to 9.7% and there was no significant difference between treatments in incidence of polyspermy. When morphologically normal ova with cumulus mass were cultured for 66~72h in a plastic mini-straw to undergo fertilization in vitro, the mean percentage of embryos developed to 2-16 and 4-16cell stage was 61.8 and 17.6%; it was slightly(P<0.05) superior to the corresponding results from petri dish. A total of 52 two-cell embryos fertilized in a mini-straw were transferred to seven pseudopregnant rat. Among these recipients, two normal young were born from one recipient which received a total of six embryos. These results suggest that superovulated oocytes are proportionately less competent than normally ovulated oocytes to undergo fertilization in a controlled environment using an in vitro fertilization technique. Also, a plastic mini-straw designed was slightly superior to petri dish as a culture vessel for fertilization and embryo development in vitro.

미성숙 흰쥐에 있어서 과잉배란 유기시 PMSG용량이 체외수정에 의한 수정율과 수정란의 배양에 미치는 영향을 조사하고, 체외수정 및 배양용기로서 plastic mini-straw의 이용효과와 체외수정란의 이식성적을 조사한 바 다음과 같은 결과를 얻었다. 미성숙 흰쥐(체중 65~80g)에게 PMSG를 4, 10, 16 혹은 40IU를 1회 근육주사한 후 72시간에 채란한 난자 중에서 난구세포괴를 가진 정상형태의 난자와 정소상체 미부에서 채취하여 예비배양한 정자로 체외수정시켰다. 체외수정율은 PMSG 용량이 증가될수록 감소하였는데, 즉 4IU에서는 70.8%였으나, 40IU에서는 45.0%로 유의적으로 (P<0.05)저하하였다. 그러나 다정자 수정발생율은 2.3~9.7%로서 PMSG 용량에 따른 유의적인 증가는 없었다. 이 결과는 과량의 PMSG의 투여로 배란된 난자 중에서 일부는 비록 난자가 형태학적으로는 난구세포괴를 가지는 정상적인 난자일지라도 체외수정율의 저하는 정상적인 배란시간보다 조기배란으로 난자의 노화로 인하여 수정에 적합하지 않음을 제시하고 있다. 그리고 plastic mini-straw를 고안하여 straw내에서 체외수정시킨 후 66~72시간까지 배양시험한 결과 2-16와 4-16세포기까지 발달된 배의 비율은 petri dish보다 다소 우수(P<0.05)하였으며, straw용기에서 체외수정된 2세포기의 52개의 배를 7마리의 위임신 흰쥐에게 이식시켰던 바 6개의 배를 이식 받은 한 마리의 수란쥐가 2마리의 새끼를 분만하였다.