KSBB Journal

The Korean Society for Biotechnology and Bioengineering (한국생물공학회)
권호 표지

High Frequency Electroporation-Transformation System for Coryneform Bacteria

전기장 충격법에 의한 코리네헝 세균의 고효율 헝질전환

  • 노갑수 (제일제당(주) 종합연구소) ;
  • 김성준 (제일제당(주) 가공식품개발센터 제일제당(주) 종합연구소 제일제당(주) 종합연구소 제일제당(주) 가공식품개발센터)
  • Published : 1990.11.01
Download PDF
⟨ Previous Next ⟩

Abstract

Escherkchla coli/Cownebacterium glutamicum shuttle vectors, pECCGl and pECCG2 were constructed by joining a 3.0 kb C. glutamicum cryptic plasmid pCBl and a 3.94 kb E. coli plasmid pACYC177. Using the plasmid pECCGl, various parameters involved in electroporation system including electric field strength, resistance, DNA concentration, cell concentration and growth stage were investigated independently and optimized for the high efficiency transformation of coryneform bacteria. Transformation efficiencies of 106 transformants/$\mu\textrm{g}$ of plasmid DNA were achieved with Corynebacterium glutamicum.

대장균과 코리네형 세균간의 shutle vector pECCGI과 pECCD2를 제작하고, plasmid pECCGI과 glycine배지에서 다양한 Corynebacterium glutamicum을 사용하여 전기장 충격법에 의한 형질전환에 있어서 여러 조건을 조사한 결과 세포 현탁액 40ul와 DNA 2ul의 혼합액 사용시 저항 600 obms, 전기장의 세기 12.5kv/cm, DNA양 10ng, 세포수 $4.5$\times$10^8$와 세포회수 시기를 1.0이하의 $A^6^0^0$으로 했을때 $10^6$transformants/ug of DNA의 형질전환 효율을 보였다.

Keywords