Somatic Hybrids by Electro-Protoplast Fusion between N. tabacum and N. glutinosa

담배(N. tabacum)와 N. glutinosa 종간 원형질체 융합식물의 생성

Protoplasts, isolated from leaf of N. tabacum NR-/SR+ and N. glottnosa were electrofused and divided with a plating efficiency of 30∼35% in AAPI 9M medium. Green callus lines were selected in protoplast-derived colonies on MSNO3 selection medium with 1.2mg/ml streptomycin sulfate on the basis of nitrate reductase proficiency and streptomycin resistance. Four putative hybrid plant lines regenerated from the green callus lines had intermediate morphology between that of parents with respect to floral shape, corolla length and ovate leaf blade. Zymograms of leaf peroxidase and esterase from these putative hybrid plant lines showed isozyme profiles derived from both parents and also, they exhibited additional and lost bands. Cytological analysis of two putative hybrid plant lines gave chromosome counts of 2n=66 in L22 and 2n=54 in L44 which were less than the expected number of N. tabacum(2n=48) and N. glutinosa(2n=24).

N. tabacum $NR^-/SR^+$과 N. glutinosa의 엽육세포로부터 원형질체를 분리하여 전기적으로 융합 및 배양하였으며 AAPI 9M 배지에서 이 원형질체의 plating effici-ency는 30~35%였다. 분열 중인 소형 세포괴는 1.2mg / ml의 streptomycin이 포함된 $MSNO_3$배지에 치상하여 계속 분열을 유지하는 녹색 칼루스 계통을 선발하였다. 이 녹색 칼루스 계통에서 유래된 4계통의 식물들은 꽃의 형태, 화관의 길이와 염신의 모양에서 양쪽 모식물체의 중간형을 보였고, 엽조직의 peroxidase와 esterase의 isozyme분석에서도 양쪽 모식물체의 특성을 부분적으로 함께 나타냈으며 또한 결실되거나 새로운 isozyme band도 보였다. 이 융합체 추정계통들의 염색체 분석에서 L22계통에서 2n=66, L44계통에서 2n=54개가 조사되어 N.tabacum(2n=48)과 N.glutinosa(2n=24)의 융합체는 염색체의 부분적 감소현상을 보였다.