Abstract
The maximum nitrogen fixation activity of the associative, microaerobic and acid tolerant bacteria, Azospirillum amazonense Kp1 was obtained with 0.2Kpa of $O_{2}$ and showed a reversible inhibition by the higher concentrations. Ammonium treatment caused a gradual inhibition of the activity up to 350mM. The nitrogenase systems were purified by gradient chromatography on DEAE-52 cellulose, heat treatment and preparative PAGE. The MoFe protein showed molecular weight of 210,000 including two nonidentical subunits with apparent molecular weights of 55,000 and 50,000 and an isoelectricpoint of 5.2 and contained 2, 24 and 28 atoms of Mo, Fe and acid labile S per molecule. The Fe protein revealed molecular weight of 66,000 including two types of subunits with molecular weights of 35,000 and 31,000 and an isoelectric point of 4.6, and contained 4 atoms of Fe and 6 atoms of S per molecule. The maximum specific nitrogenase activity attained 2,200 and 1,700nM $C_2H_4mg^{-1} min^{-1}$, respectively for MoFe and Fe proteins at pH7 and $35^{\circ}C$. The activity was lost after 10 and 30 days under the cold room ($4^{\circ}C$) condition for Fe and MoFe proteins, respectively.
식물근권에서 분리된 협생의 미호기성 및 내산성인 A. amazonense Kpl의 질소고정은 용존산소농도 0.2 KPa에서 최대활성을 보였다. 혐기상태 또는 고농도의 산소조건에서는 가역적으로 활성이 저해되였고, 암모늄처리는 350mM 농도까지 점차적으로 활성을 억제하였다. 최대 질소고정활성을 갖는 균체로부터의 효소추출액을 DEAE-52 크로마토그래피, 열처리 및 PAGE에 의해 순수분리한 질소고정효소계인 MoFe 단백질은 분자량이 210,000달톤으로 55,000 및 50,000 달톤인 각각 2개의 서브유닛트를 갖고,2원자의 MO,24원자의 Fe 및 28원자의 S를 함유하며, 등전점이 5.2 그리고 최대비활성이 2,200nM $C_2H_4mg^{-1} min^{-1}$였다. Fe 단백질은 분자량이 66,000달톤으로 35,000 및 30,000달톤인 서브 유닛트로써 구성되고, 4원자의 Fe 및 6원자의 S를 함유하며, 등전점이 4.6으로 산성이고, 최대비활성이 1.700nM $C_2H_4mg^{-1} min^{-1}$였다. 이 효소계는 pH7, 온도 $35^{\circ}C$에서 최척할성을 나타내었고, $4^{\circ}C$에서 MoFe 단백질과 Fe단백질은 각각 30일과 10일 정도 활성을유지하였다.
