F9 Teratocarcinoma Stem Cell의 분화에 따른 라미닌의 발현

Expression of Laminin During the Differentiation of F9 Teratocarcinoma Stem Cell

본 실험은 레티노익산에 의해 F9 Teratocarcinoma Stem Cell의 분화를 유도하고 이분화과정에서 세포형태의 변화와 라미닌유전자의 발현을 조사 하였다. 분화되지 않은 F9 Stem Cell은 지속적으로 증식을 하며 세포간의 간격을 구분하기 어령루 뿐만 아니라 불규칙적인 모양을 하고 있으나,레티노익산과 dibutyryl cyclic AMP처리후의 분화된 F9세포는 둥글고 평평한 모양을 나타내며 세포성장은 중지되었다. Northern blot분석에 의하여 레티노익산과 cyclic AMP처리 후의 F9세포내에서 라미닌 유전자의 발현은 현저하게 증가하였다. 즉, 라미닌 B1유전자 발현은 분화과정 동안 최소한 30배, 라미닌 B2 유전자의 발현은 약 20배 증가하였다. 또한 라미닌 항체를 이용한 면역형광 분석결과는 Northern 분석결과와 일치하게 분화 후에 라미닌 단백질 합성이 크게 증가되었으며, 생성된 라미닌 단백질은 거의 세포표면에 분포된 것으로 나타났다. 이러한 결과로부터, 레티노익산에 의해 F9 Stem Cell의 분화가 유도되며 이 분화과정에서의 형태적인 변화와 진행은 라미닌의 생성과 밀접한 관련이 있다고 추측된다.

In order to investigate the retinoic acid indticed-differentiation of F9 teratocarcinoma stem cell, we have analyzed the change of cell morphology and laminin expression after exposure to retinoic add and cyclic AMP. It is shown that undifferentiated F9 stem cells grow as closely packed colonies, and it is difficult to distinguish cell-cell boundaries. After retinoic add and dibutyryl cyclic AMP treatment, F9 cells assume a flat morphology characterized by perinuclear granules and arrest growth. According to Northern blot analysis, laminin expression was increased markedly after retinoic acid treatment. Laminin Bi gene expression was increased at least 30-fold and laminin B2 gene expression was increased approximately 20-fold during differentiation process. Employing immunofluoresence analysis, it was proved that the synthesis of laminin protein was low level in F9 stem cell whereas it became high level in retinoic acid treated F9 cell and the laminin protein was largely accumulated in the cell surface. Our results suggest that induction of laminin Bi and B2 genes m F9 cells is retinoic acid-mediated control, and morphological change and differentiation of F9 cells might be associated with laminin gene expression.