Determination of Protein Amino Acids as the N-TFA N-Butyl Esters by Gas Liquid Chromatography

Gas Liquid Chromatography에 의한 단백질 아미노산의 분석

For effective separation of the N-TFA n-butyl ester amino acids on the stainless steel column by GLC, dual column of the mixed stationary phases, 3.36% OV-17+3.0% SE-30(column 1) and 1% NPGS +0.5% OV-17+0.5% SE-30(column 2) on chromosorb W HP 100-120 mesh, were used. On the column 1. the nineteen amino acids except histidine were obtained. However, alanine and valine peaks were not separated by this column. On the column 2, the sixteen amino acid peaks showed good separation, but tryptophan. arginine, histidine, and tyrosine peaks were not obtained. Calibration graphs for all amino acids obtained by the plotting the ratios of their peaks hights to that of internal standard versus the micro mole of the amino acids in the range $1.25{\times}10^{-3}{\mu}mol-1.0{\times}10^{-2}{\mu}mole$ showed linearity and passed through the origin.

GLC를 이용 N-TFA n-butyl ester유도제화에 의한 아미노산 분석시 stainless steel packed column으로 효과적인 분리를 할 수 있는 고정상을 찾기 위하여 다음과 같은 2개의 column을 개발하여 표준 아미노산의 N-TFA n-butyl ester 유도체를 분석하였다. Column 1;3.36% OV-17+3.0% SE-30 on chromosorb W HP 100-120 mesh. Stainless steel column $(2m{\times}3mm\;I.D.)$ Column 2;1% NPGS+0.5% OV-17+0.5% SE-30 on chromosorb W HP 100-120 mesh. Stainless steel column $(2m{\times}3mm\;I.D.)$ Column 1에서 histidine을 제외한 19개의 아미노산 peak가 나타났으나 alanine과 valine peak는 분리되지 않았다. Colume 2에서는 15개의 아미노산이 좋은 분리를 이루었고 column 1에서 분리되지 않은 alanine과 valine.이 잘 분리되었으나 column 1에서 분리된 tryptophan, arginine 및 tyrosine이 나타나지 않았다. 분리된 모든 아미노산은 column 1, 2를 막론하고 아미노산 주입량 $1.25{\times}10^{-3}{\mu}mole-1.0{\times}10^{-2}{\mu}mole$의 범위에서 각 아미노산 peak의 높이와 내부표시제 peak 높이와의 비에 대한 주입량으로 나타낸 검정선이 선형을 나타내었고 모두 원점을 지났다. Glutamine, asparagine 및 cystine은 column 1,2에서 모두 glutamic acid, aspartic acid 및 cysteine peak와 일치하는 것으로 보아 N-TFA n-butyl ester 유도체를 만드는 과정에서 염산에 의해 각각 glutamic acid, aspartic acid 및 cysteine으로 전환되는 것으로 사료된다.