Genetic Analysis of Caulobuter crescentus by Using Transposon Tn5 and Reverse Field Electrophoresis

Transposon Tn5 및 Reverse Field Electrophoresis를 이용한 Caulobuter crescentus의 유전자 분석 연구

The bacteriophage Mu and transposon Tn5 containing plasmid pJB4JI-transferred transposon Tn5 to Caulobuter crescentus. When several thousand of transposon Tn5 insertion mutants were examined, we found auxotrophic and motility mutants at frequencies of 2％ and 3％, respectively. Transposition of transposon Tn5 was analyzed by the reverse field electrophoresis and Southern hybridization. The results indicated that transposon Tn5 was randomly inserted to Caulobuter crescentus chromosome but the plasmid vector, pJB4JI, was not maintained.

일반적으로 Mu phage를 가지고 있는 plasmid를 장내 세균에 삽입시키면 대부분의 Mu에 민감한 세균들은 zygotic induction이 일어나서 recipient cell 들이 살아남지 못하게 된다. 그러나 Mu 저항성 세균을 사용하면 cell이 죽지않고 recipient내에 삽입되는데 그 정확한 현상은 아직 밝혀지지 않았으나 Mu의 복제에 필요한 host의 기능이 결여된 것으로 추정되고 있다. 또한 reverse field electrophoresis를 사용하여 insertion mutant 나 deletion mutant들 의 염색체 및 거대 분자 DNA의 변이를 쉽게 비교 분석할 수가 있다. 본 실험에서는 Mu phage 저항성 C. crescentus를 사용하여 Tn5에 의한 영향 요구성 돌연변이주 출현률 및 운동성 돌연변이주 출현률을 조사한 결과 2%∼3% 수준으로 돌연변이가 일어났으며 이들 변이주들의 염색체를 Dra I 제한효소로 절단한 다음 reverse field electrophoresis로 분석한 결과 영양 요구성 돌연변이 균주들은 Tn5가 여러 위치에, 운동성에 돌연변이를 일으킨 균주들은 유사한 위치에 Tn5가 삽입된 것을 확인할 수 있었으나 hybridization 방법으로 확인한 것처럼 동시에 여러 위치를 확인할 수는 없었다. 그러나 이와 같은 문제들은 전기장의 교차시간 간격을 조절함으로 더 정확하게 확인할 수 있을 것으로 사료된다.