Improvement of an hydroxyapatite bead adherence assay for streptococcus sanguis

Streptococcus sanguis의 구형 Hydroxyapatite 비드에의 부착 Assay 방법의 개량

The purpose of the present investigation was to improve several procedures being used in the adherence assay of Streptococcus sanguis cells to hydroxyapatite (HA) beads and to study the effect of the beads on the counting of radioactivity. The standard adhere assay involved the adherence of radiolabeled bacteria to 40mg of HA beads. The beads were mixed with ['H]thymidine-labeled bacterial cells and incubated for 60 minutes at room temperature. Unadsorbed cells were removed, the beads with adsorbed cells were dried, and the radioactivity was monitered in a scintillation spectrometer. The 30 seconds sonication of cells in a form of long chains appeared to be adequate for obtaining mostly singlet or doublet cells. Unlike the counting of S. sanguis cell suspension, bacterial cells adhered to HA or saliva-coated HA(SHA) required smaller volume (2.5ml) of scintillaton fluid for better counting. Eighteen percent quenching of counts could be attributed to the beads. Among 3 procedures commonly used to equilibrate the beads for adherence assay, no differences were found in their effectiveness. The HA beads on which the bacteria remained attached in scintillant during the counting were found to be the source of sample self-absorption representing 34.5% of the total radioactivity counts resulting from the beads dissolved in HCl solution.

HA 비드에 부착한 S. sanguis 세포는 방사능 측정시 칵테일 속에서 비드에 여전히 부착되어 있음으로 비드에 의한 방사능의 sel-absorpiton이 일어났으며 그 정도는 염산용액으로 비드를 용해시킬 때 측정한 반사능값의 34.5% 이었다. 현탁액으로 준비한 세포의 방사능 측정과는 달리 HA 또는 SHA에 부착한 세포의 경우에는 소량의 scintillation 용액(2.5ml) 사용에서 더 좋은 측정값을 얻었다 . HA 비드에 의한 칭은 약 18% 이었다. 부착 assay 에 사용할 HA 비드 준비에 보통 이용되는 3가지의 dqkdqjqdm 비교에서는 차이가 없었다. 부착실험용의 세균세포는 초소리파로 세균사슬을 끊었는데 30초간의 파절로 세포하나 또는 두개로 주로 구성된 현탁액을 얻을 수 있었다. 본 연구에서는 HA 비드에 부착한 S. sanguis 세포를 측정할 때 self-absorpiton이 일어남을 발견하였고 부착한 세균을 비드에서 탈락하거나 또는 비드를 용해시킨 후 측정함으로써 self-absorption을 제거할 수 있었다. 그리고 부착한 세균의 방사능 측정에서는, 적정의 칵테일량을 발견하여 사용하므로 측정값을 유의하게 증가시킬 수 있었다. 수 있었다.