Isolation of Protoplasts from Flammulina velutipes

팽이버섯(Flammulina velutipes)의 원형질체(原形質體) 나출(裸出)

To obtain basic information for the genetic analysis and breeding of Flammulina velutipes, some factors affecting the release of protoplasts from the fungus were studied. Potato Dextrose peptone Agar medium was suitable for the growth of the mycelium and the protoplast formation of F. velutipes. The culture age for the high yields of protoplast was 5 days on PDPA. Few protoplasts were formed from the mycelium cultured on Mushroom minimum Media. The highest yield of protoplasts was obtained in enzyme solution containing Novozyme 234 plus cellulase CP at 10 mg $ml^{-1}$ concentration, while a half amount of protoplasts was obtained in enzyme solution containing Novozyme 234 only. The optimal reaction time of the mycelium in the Iytic enzyme mixtures was 3 hours. The best osmotic stabilizer for the protoplast formation of the mycelium was 0.6M sucrose without buffer at pH 6.2.

평이버섯의 유전연구(遺傳硏究)와 신품종(新品種) 육성(育成)의 기초자료(基礎資料)를 얻기 위하여 팽이버섯의 원형질체(原形質體) 나출(裸出)에 영향(影響)을 미치는 제(諸) 요인(要因)을 구명(究明)한 결과(結果)는 다음과 같다. 팽이버섯의 균사생장(菌絲生長) 및 원형질체(原形質體) 나출(裸出)에 알맞은 배지(培地)는 Potato Dextrose peptone Agar였으며 5일간(日間) 배양(培養)된 지수적(指數的) 생장기(生長期)의 균사체(菌絲體)에서 원형질체(原形質體) 나출량(裸出量)이 가장 많았다. MMM 배지(培地)에서는 전혀 나출(裸出) 되지 않았다. 원형질체(原形質體)의 나출(裸出)은 Novozyme 234+Cellulase CP를 10 mg$ml^{-1}$ 농도(濃度)로 사용(使用)하였을때 $52.0{\times}10^{5}ml^{-1}$로 가장 높았으며 최적(最適) 반응시간(反應時間)은 3시간(時間)이었다. Novozyme 단독처리구(單獨處理區)에서는 나출량(裸出量)이 반정도 였다. 효소액(酵素液) pH의 영향(影響)은 삼투압조절제(參透壓調節劑)의 종류(種類)에 따라 차이(差異)를 보였다. 예소액(醴素液)의 반응시간(反應時間)은 Novozyme 234+cellulase CP 10 mg $ml^{-1}$의 경우 3시간(時間) 후(後) 최대(最大) 조출량(操出量)을 보였다. 삼투압조절제는 0.6 M의 Sucrose가 효과적(效果的)이었으며 완형액(緩衡液)없이 pH 6.2로 사용(使用)할 때 원형질체(原形質體)의 나출량(裸出量)이 가장 많았다.