Detection of circulating antigens in rats experimentally infected with Paragonimus westermani by ELISA

ELISA법을 이용한 폐흡충 감염 백서의 혈청내 항원 검출

Circulating antigens in rats experimentally infected with Paragonimus westermani were examined by ELISA. From a total of 22 albino rats, each fed with 25 metacercariae, blood samples were collected until 12 weeks after infection. The specific antibodies against P. westermani in the serum of an infected cat were purified by ammonium sulfate precipitation, DEAE anion-exchange chromatography and affinity chromatography serially. So-called double antibody sandwich ELISA method was used for the detection of circulating antigens. The results were as follows: Mean value of O.D. in control sera was O. 04 (S.D.=0. 04). After infection, mean O.D.(S.D.) values were changed serially: 0.03(0.01) at 0.5 week(3 days), 0.55(0.50) at 1 week, 0.69(0.45) at 1.5 week, O.20 (0.19) at 2 weeks and O.13(0.10) at 2.5 weeks of infection. They returned, thereafter, to the level before infection. When O. 16 (mean+3 S.D.) were considered as cut-off value, those higher than O. 16 were observed only in the sera collected between 1 and 2.5 weeks after infection. Average 8. 4 immature worms (2.2 from the lungs and pleural cavities; 6.2 from muscles) were recovered in a rat at 12 weeks after infection. The fact that circulating antigens were not detected after 3 weeks of infection was considered to the caused by the formation of antigen-antibady complexs.

실험적으로 폐홉춘을 감염시킨 백서의 혈청내 항원을 ELISA 법으로 측정하였다. 시험용 혈청은 폐흡충의 피낭유충을 마리당 25개씩 먹인 총 22마리의 백서에서 감염후 12주가 될 때까지 채혈하여 얻었다. 폐흡충에 대한 특이항체는 폐흡충 감염 고양이의 혈청으로부터 ammonium sulfate 침전과 anionezchange chromatography를 이용, IgG를 분리한 후 affinity chromatography를 이용하여 순수분리하였다. 항원을 찾기 위한 ELISA는 소위 "double antibody sandwich method"를 사용하였다. 대조로서 사용한 감염전 혈청의 O.D.치 평균값은 0.04(표준편차 0.04)이었으며 감염후 O.D.치 (표준편차)의 변화를 보면 0.5주(3일)는 0.03(0.01), 1주는 0.55(0.50), 1.5주는 0.69(0.45), 2주는 0.20(0.19), 2.5주는 0.13(0.10)이었고 감염 3주 이후는 대조 혈청의 값으로 떨어졌다. 대조혈청의 $평균간+3{\times}$ 표준편차, 즉 0.16이하를 이 system에서의 비특이적 수치로 잡았을 때 이 이상의 수치를 나타낸 경우는 감염 후 1주부터 2.5주까지의 혈청에서만 관찰되었다. 한편 감염 12주 후에 총 10마리의 백서를 희생시켜 유충을 회수하여 보았다. 폐와 흉강에서는 평균 2.2마리, 근육에서는 평균 6.2마리의 유충을 회수할 수 있었다. 폐흡충 감염 백서에 있어 충체가 생산하는 항원은 감염 1주 후부터 혈청 내에서 검출되었다. 그러나 감염 3주후부터는 검출되지 않았는데 이것은 항원-항체 복합체 형성에 의한 반응 저해 현상에 의한 것으로 생각되었다.