A study on the protoplast formation and regeneration of Lactobacillus casei YIT 9018

Lactobacillus casei YIT 9018 의 원형질체 생성과 재생에 관한 연구

Optimum conditions for the protoplast formation and regeneration of Lactobacillus casei have been searched for. L. casei cells were converted to protoplast by treating with 10$\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$ of mutanolysin in 20mM potassium phosphate buffer (pH6.8) containing 6mM CaCl$_2$, 6mM MgCl$_2$ and 1M sucrose. Maximum number of protoplasts was obtained when cells were taken from Tomochika's medium containing 0.5% glycine at the middle to late logarithmic growth phase. Regeneration was efficiently accomplished on the regeneration medium containing 6mM CaCl$_2$, 6mM MgCl$_2$, 0.8M sucrose and 10% of horse serum. The efficiently of the cell wall regeneration from protoplasts was 2-5% after 3-4 days of incubation at 3$0^{\circ}C$.

Lactobacillus casei 균주의 protoplast 형성과 정상세포로의 재생에 관한 최적조건이 연구되었다. Lactobacilus casei 균주들은 sucrose 1 mole이 함유된 20mM potassium phosphate완충액 (pH6.8)에서 mutanolysin을 10 $\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$ 농도로 처리하였을 때 용이하게 protoplast가 형성되었다. Protoplast의 최대형성은 균주가 0. 5%의 glycine이 함유된 TCM 배지에서 생장이 대수기 중기에서 말기에 도달된 세포를 수확하여 사용했을 때에 이루어졌다. 세포 재생은 6 mM CaCl$_2$, 6mM MgCl$_2$, 0.8 M sucrose 그리고 horse serum 10%가 함유한 재생 배지에서 효율적으로 이루어 졌다. Protoplast의 세포벽 재생 빈도는 3$0^{\circ}C$에서 3-4 일간 배양후 2-5% 범위로 나타났다.