알카리내성 세균의 생리적 특성 및 형질전환

Physiological properties and transformation of alkaline-tolerant bacteria

새로운 알카리내성 숙주균주를 개발하기 위하여 토양으로부터 알카리조건하에서 생육하는 미생물을 분리하고 이들 중에서 amylase활성과 Protease활성 및 항균력을 동시에 가지며 plasmid pUB 110이 형질전환 되어 이 plasmid가 안정하게 유지되는 균주를 선정하여 알카리내성 Bacillus sp. YA-14로 동정하였다. 분리균주의 amylase와 protease는 각각 pH 8.0과 pH 7.5에서 가장 활성이 높았으며 피검균으로 사용한 B. subtilis와 Sarcina lutea에 항균력을 나타내었다. 분리균주의 형질전환에는 0.4% MgSO$_4$ 가 함유된 modified SPI배지 (MSPI, pH8.0)를 사용하였으며 말기대수증식기의 균체가 적당하였다. Transformant는 20세대 계대배양 후에도 pUB,110plasmid가 안정하게 유지되어 형질발현되었다. 이 결과로부터 분리균주는 Bacillus속의 host-vector계에서 새로운 알카리내성 숙주균주로서 이용할 수 있는 가능성을 보여주었다.

To develop the potential use as new host strain for gene cloning, alkaline-tolerant isolates from soil were examined for amylase activity, protease activity, antimicrobial activity and transformability by using plasmid pUB 110. Of these strains, one was selected and identified as Bacillus sp. YA-14. in the enzymatic properties of Bacillus sp. YA-14 the optimal conditions for the reaction of amylase and protease were at pH 0.8 and pH 7.5 respectively. The antimicrobial activity of Bacillus sp. YA-14 was also found. For the transformation, Bacillus sp. YA-14 was cultured to late logarithmic growth phase ai 37$^{\circ}C$ in modified SPI medium (pH 8.0) containing 0.4% MgSO$_4$. The presence of pUB 110 plasmid DNA in transformants was confirmed by electrophoresis and stably maintained in the new host.