Abstract
The optimal conditions for the formation and the regeneration of Pseudomonas spheroplast were measured. Pseudomonas spp. cells were transformed to spheroplasts from 99.0% to 99.9% by treatment of $100{\mu}g/ml$ lysozyme and 10mM EDTA at room temperature. The optimal pH for the spheroplast formation was pH 8.0. Magnecium chloride, calcium chloride and streptomycin were effective on the stabilization of Pseudomonas spheroplast, while $Mg^+\;and\;Na^+$ ions were effective on the formation of Pseudonomas spheroplast. Rich Regeneration Medium was used for the regeneration of Pseudonomas spheroplast. To improve regeneration frequency, Bovin Serum Albumine and cationic ions were added to the spheroplast dilution beffer and regeneration environment respectively. Treatment of 20mM calcium chloride in ehr Rich Regeneration Medium could improve the yield of regenerants as much as 28-fold. Treatment of 1% Bovin Serum Albumine in the spgeroplast formation and dilution buffer increased the yield of regenerants to 10-fold. Also, the regeneration frequency was improved to 14-fold shen Rich Regeneration Meidum containing 0.5% Gelatin was used for regeneration as well as 1% Bovin Serum Albumine.
Pseudomonas 속에 속하는 여러균주의 원형질체 생성을 위한 최적조건과 이들의 재생에 영향을 미치는 몇 가지 요인들을 조사하였다. Pseudomonas는 lysozyme ($100{\mu}g/ml$)과 10mM EDTA를 처리하였을 때 99.0%에서 99.9%까지 원형침체로 천환 되었으며, 이때 사용한 완충액의 최적 pH는 8.0이였고 효소처리는 상온에서 진탕하지 않고 처리하였을 때가 비교적 균주간에 차이가 없이 효과적으로 원형질체가 생성되었다. $MgCl_{2}$ 그러고 Streptomycin수용액이 윈형 질체의 안정성을 높였고, 원형질체의 생성에는 $Mg^+\;and\;Na^+$ 이온이 효과적으로 작용하였다. 원형질체의 재생은 Rich Regeneration Medium배지에 20mM $MgCl_{2}$를 첨가하였을 때 원형질체의 재생율이 28배까지 증가하였다. 원형질체의 생성과 그것을 희석하는데 사용한 완충액에 1% Bovine Serum Albumlne를 첨가한 경우 재생율이 10배 가까이 증가되었고, 또한 완충액에 1% BSA를 첨가하고 재생배지에 0.5% 제라틴을 첨가했을 때에는 14배까지 재생율이 증가되어다.