Abstract
Insulin was labelled with $^{125}$ I using lactoperoxidase as an oxidizing agent. The reaction product was purified via two stages: a starch gel electrophoresis(SGE) and a Sephadex gel filtration (SF). Upon comparison of the labelling yields and the bindabilities of the labelled insulin to its antibody, it has been found that the enzyme method shows higher yields (50%) and the better bindability to its antibody than the conventional chloramine-T method (35%). By checking the insulin blank labelling mixture with a SGE, a paper chromatography, and a radioautography technique, a by-product in the lactoperoxidase method has been identified. The separated fractions in SGE and SF were also analyzed and discussed.
락토퍼옥시데이즈(lactoperoxidase, LPO)를 사용하여 인슈린을 $^{125}$/I로 표지반응 시켰다. 반응생성물은 전분젤 전기영동(SGE) 과 세파덱스 젤여과(SF) 둥 두단계를 거쳐 정제하였다. 표지수율 과표지생성물의 항체에 대한 결합능으로 보아 종래의 클로라민-T법 (표지수율 약 35%)보다 효소법 (표지수율 약 50%)이 우수하였다. 인슈린의 첨가없이 LPO법으로 표지반응을 진행시킨 다음 SGE, 종이 크로마토그래피, 방사선사진술 등을 적용하여 LPO법에서의 부산물을 확인할 수 있었다. SGE와 SF에서의 분리 분별 부분에 관해서도 분석, 토의하였다.