Comparison of various cell lysis methods for Pichia pastoris

Cell lysis method is very important to study intracellular metabolites in microorganisms. In this study, various cell lysis methods were compared to find a good method analysing intracellular metabolites in P. pastoris. P. pastoris was cultivated in YPD medium at 30 $^{\circ}C$, 200 rpm for 24 hours and its morphology as well as the change in strain's shape were observed by microscopy. The UV/vis spectrophotometer was used to measure intracellular protein concentrations.

10 g/L yeast extract, 20 g/L peptone, 20 g/L dextrose가 첨가된 YPD 배지를 이용하여 200 rpm, 30 $^{\circ}C$에서 24시간 배양한 Pichia pastoris x-33과 KM71H를 각각 대수증식기에 시료를 채취하여 4000 g, 4 $^{\circ}C$에서 5분간 원심분리하여 펠릿에 멸균된 증류수를 500 ${\mu}{\ell}$ 넣고 4000 g, 4 $^{\circ}C$에서 5분간 원심분리하여 2-3회 세척한 후 보관하여 각기 다른 4가지 방법으로 세포를 파쇄하여 얻은 시료를 현미경관찰을 통하여 형태의 변화를 관찰하였다. 12000 g, 4 $^{\circ}C$에서10분간 원심분리하여 얻은 상등액에 시약 500 ${\mu}{\ell}$와 시료 500 ${\mu}{\ell}$를 넣고 상온에서 10분간 반응하여 분광광도계를 이용하여 595 nm에서 세포 내 단백질 농도를 측정하였다. 이 결과를 바탕으로 효모를 가장 효과적으로 세포를 파쇄할 수 있는 방법을 조사하였다.