• 제목, 요약, 키워드: comet assay

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Validation of Photo-comet Assay as a Model for the Prediction of Photocarcinogenicity

  • Kim, Ji-Young;Koh, Woo-Suk;Lee, Mi-Chael
    • Toxicological Research
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    • v.22 no.4
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    • pp.423-429
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    • 2006
  • Recent reports on the photocarcinogenicity and photogerotoxicity of many compounds led to an increasing awareness for the need of a standard approach to test for photogenotoxicity. The comet assay has been recently validated as a sensitive and specific test system for the quantification of DNA damage. Thus, the objectives of this study are to investigate the utility of photo-comet assay for detecting photo-mutagens, and to evaluate its ability to predict rodent photo-carcinogenicity. Photo-comet assays were performed using L5178Y $Tk^{+/-}$ mouse lymphoma cells on five test substances (8-methoxypsoralen, chlorpromazine, lomefloxacin, anthracene and retinoic acid) that demonstrated positive results in photocarcinogenicity tests. For the best discrimination between the test substance-mediated DNA damage and the undesirable DNA damage caused by direct UV absorption, a UV dose-response of the cells in the absence of the test substances was firstly fnalized. Out of 5 test substances, positive comet results were obtained for chlorpromazine, lomefloxacin, anthracene and retinoic acid while 8-methoxypsoralen found negative. An investigation into the predictive value of this photo-comet assay for determining the photocarcinogenicity showed that photo-comet assay has relatively high sensitivity. Therefore, the photo-comet assay with mammalian cells seems to be a good and sensitive predictor of the photocarcinogenic potential of new substances.

BaP 및 TBT에 노출된 넙치와 개조개의 in vivo Comet assay (In vivo Comet Assay on Flounder and Clam Exposed to BaP and TBT)

  • 김소정;정영재;이택견
    • Ocean and Polar Research
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    • v.33 no.2
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    • pp.127-133
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    • 2011
  • The comet assay, also called single-cell electrophoresis (SCGE) assay, is a potential sensitive monitoring tool for DNA damage in cells. The primary objective of this study was to use comet assay to ascertain if the blood cells of flounder (Pleuronichthys olivaceus) and muscle cells of clam (Saxidomus purpurata) are suitable for genotoxicity screening. This was achieved by initially exposing blood and muscle cells under in vitro conditions to the reference genotoxin hydrogen peroxide ($H_2O_2$); strong correlation between $H_2O_2$ concentration and comet values were found. Subsequently, the identification of DNA damage in isolated cells from flounder and clam was performed under in vivo exposure to benzo(a)pyrene (BaP) and tributyltin (TBT). Flounder and clam were exposed to different concentrations (1, 10, 50, 100 ${\mu}g/L$) of BaP or TBT for 4 days. Regardless of treated chemicals, blood cells of flounder were more prone to DNA breakage compared to muscle cells of clam. In conclusion, in vivo genotoxicity of BaP and TBT can be biomonitored using the comet assay. This study suggests that flounder and clam do show potential as mediums for monitoring genotoxic damage by comet assay.

방사선조사된 채소류 및 곡물류의 DNA Comet Assay 특성 연구 (Study on the Characteristics of DNA Comet Assay for Irradiated Vegetables and Grains)

  • 서정은;오세욱;김윤지;이남혁;홍상필;김영호
    • 한국식품영양과학회지
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    • v.37 no.4
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    • pp.472-476
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    • 2008
  • 국내에서 주로 소비되는 채소류와 곡물류의 방사선조사 여부를 신속하게 검지하기 위하여 DNA comet assay의 활용 가능성을 조사하였다. 식품의 종류에 따라 세포용출시간, 세포현탁액의 정치시간 및 세포용해시간 등의 DNA comet assay 조건을 달리하여야 DNA comet이 관찰되는 것으로 나타났다. 전반적으로 방사선조사선량에 따라 comet assay 값이 증가하였는데 유의적 차이는 식품의 종류에 따라 달리 나타났다. 즉, 파는 2 kGy, 마늘은 3 kGy, 토마토는 1 kGy, 쌀가루는 9 kGy, 그리고 서리태는 3 kGy에서 방사선조사 여부에 대한 검지가 가능한 것으로 나타났다. 식물세포는 동물세포에 비해 외부의 영향에 민감하게 작용하기 때문에 DNA도 쉽게 손상되어 크기뿐만 아니라 핵의 모양도 다양하게 나타나는 것으로 보고된 바와 같이 DNA comet assay를 다양한 식품의 방사선조사 신속검지법으로 활용하기 위해서는 식품의 종류에 따른 표준화된 comet 분석조건 및 통계 분석법에 대한 가이드라인 설정이 필요한 것으로 나타났다.

Comet assay slides 에서 나타난 apoptosis 평가에서 함수 및 탈수 겔의 비교 (A Comparison of Hydrated versus Dehydrated Gels for Evaluation of Apoptosis in Comet Assay Slides)

  • 최민철;수즌엠러루;에드워드엘질럿
    • 한국임상수의학회지
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    • v.13 no.2
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    • pp.158-162
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    • 1996
  • Comet assay 는 포유류 세포에서 DNA의 파괴를 측정하는데 있어 신속하고 단순하며 시각적이고 민감한 방법이다. Apoptosis에서는 세포핵의 광범위한 DNA의 붕괴가 일어나므로 comet assay는 종양세포에서 apoptosis가 발생되었는가를 알아내는데 유용하다. 본 연구는 apoptosis 연구의 결과가 변화되지 않도록 comet assay slides를 좀 더 오래 보관할 수 있는 방법을 개발하고자 시행되었다. 개의 종양세포를 가지고 alkali comet assay를 끝낸 뒤 slides를 진공 건조기에서 꺼내서 증류수로 점적하여 10-20분간 침수시키고 현광현미경하에서 육안적으로 관찰하였다. 건조후 3-4일, 1주, 2주, 3주, 4주 및 7주의 slides에서 apoptosis 회복율(%)은 각각 98.1, 98.3, 99.4, 80.8 및 35.2%이었다. 3주 이내의 slides에서 대조군과 비교하여 apoptosis 회복율에서 차이가 없었으나 4주 이상의 slides를 건조후 침수시키는 방법을 이용하였을 때 apoptosis 평가에서 건조 후 3주간까지는 처음의 결과와 차이가 없으며, 이 방법을 이용하여 comet slide의 좀 더 긴 기간이 보관과 보관후의 재평가에서 이용될 수 있는 좋은 방법이 된다.

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DNA Comet Assay를 이용한 콩류의 방사선 조사 확인 (Detection of Irradiated Beans Using the DNA Comet Assay)

  • 오경남;김경은;양재승
    • 한국식품영양과학회지
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    • v.29 no.5
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    • pp.843-848
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    • 2000
  • 콩류의 방사선 조사 여부를 DNA comet assay로 확인하였다. 대두, 강남콩, 그리고 팥을 각각 0.1, 0.3, 0.5, 0.7, 그리고 1.0 kGy의 저선량으로 조사하고 비조사 시료와 조사시료간의 DNA 손상정도를 현미경으로 육안 검사 및 comet의 tail 길이를 측정하여 상호 비교하였다. 모든 시료에서 비조사 시료보다 조사시료의 tail 길이가 더 길었으며 조사 선량이 증가할수록 tail 길이가 길게 나타났다. 비조사 시료에서도 손상된 세포의 comet 모양의 핵이 관찰되기는 하였으나 대부분 비손상된 세포의 원형모양의 핵이 관찰되었으며 조사된 시료에서는 comet 모양의 핵이 주로 관찰되는 경향이어서 비조사 시료와 조사 시료간에 comet 양상을 비교할 수 있었다. 한편 100개의 세포를 무작위로 선택하여 comet tail 길이를 측정하고 통계분한 결과, 비조사 시료와 조사시료간의 유의적인 차이가 있었고 조사선량이 증가할수록 tail 길이가 유의적으로 증가함을 확인하였다. DNA comet assay로 간단하고 비교적 저렴한 비용을 짧은 시간 내에 콩류의 방사선 조사 여부를 확인할 수 있었다.

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인체 산화적 DNA손상에 대한 Human Biomonitoring도구로서 Alkaline Comet Assay의 활용 가능성 연구 (Application of the Alkaline Comet Assay for Detecting Oxidative DNA Damage in Human Biomonitoring)

  • 박은주;강명희
    • Journal of Nutrition and Health
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    • v.35 no.2
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    • pp.213-222
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    • 2002
  • The alkaline comet assay has been used with increasing popularity to investigate the level of DNA damage in biomonitoring studies within the last decade in Western countries. The purpose of this study was to evaluate the usefulness of the alkaline comet assay as a biomarker of oxidative DNA damage for monitoring in the Korean population, and also to evaluate the effect of nutritional status and lifestyle factors on H2O2 induced oxidative DNA damage measured by the alkaline comet assay in human lymphocytes. The study population consisted of 61 healthy Korean male volunteers, aged 20-28. Epidemiological background data including dietary habits, smoking habits and anthropometrical measurements were collected through personal interviews. After blood collection, the comet assay in peripheral lymphocytes and plasma lipids analysis was carried out and the results analyzed. Tail moment (TM) and tail length (TL) of the comet assay were use\ulcorner to measure DNA damage in the lymphocytes of the subjects. Statistically significant (p < 0.05) positive correlations were observed between DNA damage (TM or TL) and smoking habits expressed as cigarettes smoked per day and pack years (r = 0.311 and 0.382 for TM, r = 0.294 and 0.350 for TL, respectively). There were also significant positive correlations between DNA damage parameter and waist-hip ratio. Higher plasma triglyceride levels were associated with increased damage to DNA. There were no correlations between the consumption frequencies of vegetables and DNA damage to the subjects. However, consumption frequencies of fruit and fruit juice intake were inversely associated with the TM and TL. The results indicate that die comet assay is a simple, rapid and sensitive method for detecting lymphocyte DNA damage induced by cigarette smoking. Consumption of fruit or fruit juices could potentiall modify the damaged DNA in the human peripheral lymphocytes of young Korean men.

Mechanism study on DNA damage and Apoptosis induced by heak shock using Comet Assay

  • Seo, Young-Rok;Han, Sung-Sik;Kim, L. O′Neill;Ryu, Jae-Chun
    • 한국환경독성학회:학술대회논문집
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    • pp.101-101
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    • 1997
  • Comet assay, single cell gel electrophoresis has been known as useful, rapid, simple, visual, and sensitive technique for measuring the DNA breakage in mammalian ce1ls. For evaluation of DNA damage using comet assay, early studies reported a change in comet length and intensity with DNA damage using simple visual technique, such as fluorescence microscopy with eyespiece. In recent, some workers are observing and analyzing nucleotide of comets using quantitative fluorescence image analysis system to estimate 'tail moment', which is defined as the product of the tail length and the fraction of total DNA in tail. Our laboratory also adopted the image analysis software for qualification. In addition, many of the practical features of comet assay render it potentially attractive as useful tool for molecular toxicology and carcinogenesis, because the system is already showing considerable promise as rapid predictor in both in vitro and in vivo experimental designs. Recently, the comet assay becomes a attractive technique to study of apoptosis, because apoptotic fragmentation of nuclear DNA into nucleosomal sizes can be evaluated by the comet assay. So, we attempted to apply the comet assay to studying the effect of various stress on the apoptosis-sensitive cell lines. Particularly, focusing on the hyperthermic apoptosis, we could find that heat shock(44˚C for 60 minutes) was sufficient to induced apoptosis in these cell lines. But using the highly sensitive comet assay, we could not detect DNA breaks immediately after heat shock.

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DNA Comet Assay를 이용한 과일의 방사선 조사 확인 (Detection of Irradiated Fruits Using the DNA Comet Assay)

  • 오경남;박준영;김경은;양재승
    • 한국식품과학회지
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    • v.32 no.3
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    • pp.531-537
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    • 2000
  • 과일의 방사선 조사 여부를 DNA comet assay로 확인하였다. 포도, 자두, 딸기, 복숭아, 사과, 천도복숭아를 구입하여 1.0kGy이하의 저선량으로 조사하고 비조사 시료와 조사시료간의 DNA 손상청도를 육안 검사 및 측정된 comet tail length로 비교하였다. 모든 시료에서 비조사 시료보다 조사시료의 tail length가 더 길었으며 포도와 자두는 $0{\sim}0.5kGy$에서 뚜렷한 증가가 관찰되었다. 특히 자두의 비조사 시료는 포도, 딸기, 복숭아, 사과, 그리고 천도복숭아의 비조사 시료에 비해서 손상된 세포의 comet 모양의 핵이 많이 관찰되기는 하였으나 항상 비손상된 세포의 원형모양의 핵이 동반되었으며 조사된 시료에서는 모두 전반적으로 comet모양의 핵이 관찰되어 비조사 시료와 조사시료 간에 comet 양상을 비교할 수 있었다. Comet 분석을 이용한 과일의 방사선 조사 유무의 확인은 비조사 시료와 조사시료의 tail length의 측정 및 육안 검사 그리고 통계분석으로 확인이 가능하였다. 한편, 이미지 분석기와 같은 정밀한 시스템이 동반되면 저선량으로 조사된 시료들간의 comet 양상을 정확하게 확인하는 것이 가능하다고 생각된다. 따라서 식품의 'DNA comet assay'는 시료의 저장상태 및 화학적 물리적 충격에 대한 몇가지 제한점을 가지고 있지만 간단하고 신속하게 검지할 수 있으므로 다양한 식품의 방사선 조사 유무를 확인하는데 유용하게 활용될 수 있을 것으로 기대한다.

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PLHC-1세포주의 Comet assay를 이용한 하천 퇴적토의 생태독성평가 (Studies on Toxicological Evaluation of Freshwater Sediment using a PLHC-1 Cell Comet Assay)

  • 박정아;황인영;백승홍;김영숙
    • 환경생물
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    • v.29 no.1
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    • pp.23-30
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    • 2011
  • In this study, the Comet assay (evaluation of DNA damage) used the fish hepatocellular carinoma cell, PLHC-1, was tried to the sediment extract obtained from freshwater to understand its applicability as a tool for monitoring sediment toxicity. In parallel, induced EROD (7-ethoxyresorufin- O-deethylase) activity and DNA damage (TEM values) in PLHC-1 cells were measured for establishing the tandem endpoints of the PLHC-1cell test to test the ecotoxicity of sediment. Among several study sites in a small river passed through downtown and industrial park area, one of them, site B, showed a higher level of EROD activity and DNA damage than other sites. It indicates that a tandem endpoints of PLHC-1 cells could be useful tools for assessing the toxicity of sediment. The sensitivity of Comet assay with PLHC-1 cells was a little higher than that with a blood cell of frog tadpoles to the solvent extract of sediment. According to the results, a PLHC-1 cell-Comet assay could be used as a useful tool for evaluating ecotoxicity of the freshwater sediment. In addition, more detailed studies are needed to the contaminated site.

Comet assay를 이용한 방사선 조사육의 판별 (Discrimination of Irradiated Beef Using Comet Assay)

  • 정석규;박종흠;지승택;박금주;김해홍;현창기;신현길
    • 한국식품과학회지
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    • v.32 no.4
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    • pp.747-754
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    • 2000
  • Comet assay를 이용하여 방사선 조사육의 조사여부 및 조사량을 판별해내는 방법을 개발하기 위해 1-10 kGy의 감마선 조사량으로 조사한 육조직에서 일어나는 DNA 손상을 측정하였다. Comet assay에 있어 최적의 comet image를 얻기 위해 세포 분리, 세포 lysis 및 전기영동에 대한 여러 조건들을 적용하여 최적의 조건을 확립하였다. DNA 손상도는 관찰되는 comet의 평균 tail length와 tail length에 의해 구분된 4 손상 등급에의 분포, 그리고 그 분포비율에 의해 본 연구에서 제시한 식에 의해 계산한 relative damage index(RDI) 값 등으로 비교 판정하였다. 평균 tail length와 RDI 값은 조사량이 증가함에 따라 증가하여 DNA 손상도가 증가됨을 나타내었으며, 평균 tail length으로는 조사량 간의 차이를 명확히 분별하기가 어려웠던 반면 RDI 값에 의하면 조사여부 및 조사량을 판별하기에 적합함을 알 수 있었다. 국내산 한우육과 수입 냉장육에 대하여 blind test를 실시한 결과 수입육이 높은 DNA 손상도를 나타내었는데 그 RDI 값은 방사선 조사에 의한 값보다는 비교적 낮은 것이어서 수입육의 DNA 손상은 방사선 조사가 아닌 저온처리의 결과인 것으로 판단되었다. 본 연구의 결과로부터 Comet assay가 우육의 방사선 조사여부 및 조사량 판별에 유용한 기술로 응용될 수 있을 것으로 판단되었다.

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