사과탄저병균, Glomerella cingulata에 선택적으로 항균활성이 있는 세균을 분리한 후 형태 및 생리화학적인 특성을 기준으로 동정하여 Pseudomonas sp. DGUM 5051로 명명하였다. 분리균의 생장을 위한 최적 pH와 온도는 각각 6.0과 $30^{\circ}C$이었고, 최적 항균활성을 나타내는 pH와 온도는 각각 7.0와 $24^{\circ}C$이었다. 사용한 복합배지 중 생장 및 항균활성에 있어서는 Brucella, Brain heart infusion과 LB배지가 우수하였다. Mineral salts 배지에 유일 탄소원, 질소원 및 인산원으로 각각 Sucrose, $KNO_3$ 및 $K_2HPO_4$를 첨가하였을 때 우수한 항균활성을 나타내었다. Pseudomonas sp. DGUM 5061의 항균활성은 배양 12시간 경과 후에 나타났다.
해운대 연안에서 그람 음성균이면서 알긴산 분해효소를 생산하는 세균을 분리하였다. 분리된 N7151-6 균주의 성장을 위한 최적 온도는 $30^{\circ}C$, 최적 pH는 8.0으로 조사되었다. 또한 0-7%(w/v) NaCl 농도에서도 성장 가능하다. 16S rDNA 염기 서열 분석과 생화학적 분석에 의해 이 균주는 Pseudomonas 속으로 동정되어 Pseudomonas sp. N7151-6으로 명명하였다. Pseudomonas sp. N7151-6에서 생산하는 알긴산 분해효소를 한외여과(ultrafilteration; MWCO=30 kDa) 방법에 의해 부분정제하였다. 분리된 효소의 최적 pH는 7.0으로 최적 온도는 $30^{\circ}C$로 조사 되었다. pH 5.0에서 9.0까지 이 효소는 안정하였으며, $23^{\circ}C$에서 $37^{\circ}C$까지의 범위에서도 안정성을 보여주었다. 알긴산 분해효소의 전체 활성은 110 unit/L이었다.
유기용매 내성 Pseudomonas sp. BCNU 106은 독성 용매에 의해 일부 생장이 제한되므로 다양한 생존전략이 필요하다. 이러한 한계를 극복하기 위한 하나의 전략으로 외인성 트레할로오스를 사용하는 것이다. Cyclohexane 존재하에 세포내 트레할로스 함량은 12시간 배양했을 때 181.88 mM로 가장 높게 측정되었고, 세포외 트레할로스 함량은 12시간에서 16시간 사이에 급격하게 감소하였다. 또한 1%(v/v) cyclohexane, hexane, propylbenzene 및 m-xylene 존재하에 0.1 M 트레할로스가 첨가된 LB 배지에서 Pseudomonas sp. BCNU 106 균주의 생장은 트레할로스가 첨가되지 않은 대조군에 비해 각각 89.94, 89.72, 91.25 및 118.9 배 증가하였으며, cyclohexane 및 hexane 존재하에서 0.05 M 트레할로스를 첨가했을 때 4시간 동안 각각 80과 90% 이상의 높은 생존율을 보였다. 이는 배지에 첨가된 트레할로스가 세포 내로 이동하면서 cyclohexane, hexane, propylbenzene 및 m-xylene 스트레스에 대해 방어작용을 한 것으로 보인다. 따라서 성장배지에 트레할로스를 첨가함에 따라 Pseudomonas sp. BCNU 106의 유기용매 내성이 향상되어 생물전환 및 생물분해에 대한 잠재적인 생물촉매로 사용 가능할 것이다.
폐광지역으로부터 quinoline (2,3-benzopyridine)을 유일한 탄소원, 질소원, 그리고 에너지원으로 이용하는 세균 NFQ-1을 농화 배양기법을 통하여 분리하였다. 분리된 세균은 그람음성의 간균으로서 BIOLOG 시험을 통하여 Pseudomonas nitroreducens로 동정되었으며, 본 연구에서는 Pseudomonas sp. NFQ-1으로 명명하였다. Quinoline의 분해는 호기적 조건하의 B-배지에서 Pseudomonas sp. NFQ-1를 이용하여 실시되었다. 균주 NFQ-1 세균은 2.5 mM quinoline을 9시간 이내 완전히 분해하였다. 배양기간 동안 quinoline 분해의 중간대사산물인 2-hydroxyquinoline이 일시적으로 생성되었다가 배양기간 후반부에 사라졌다. 배양의 초기 pH 8.0은 6.8로 감소하다가 배양이 진행됨에 따라 7.0이 되었다. 대상 기질로서 quinoline의 농도가 증가함에 따라 생장곡선에서 유도기가 길어졌으며, 고농도의 quinoline (>15 mM)은 주어진 조건에서 균주의 생장과 quinoline의 분해를 억제하였다. 부가 질소원으로 7.6 mM $(\textrm{NH}_{4})_{2}\textrm{SO}_{4}$의 첨가조건하에서 Pseudomonas sp. NFQ-1은 2-hydroxyquinoline, p-coumaric acid, benzoic acid, p-cresol, p-hydroxybenzoate, protocatechuic acid, catechol 등의 다양한 화합물을 이용할 수 있었으나 일부 화합물들 (예, 6-hydroxyquinoline, 8-hydroxyquinoline, coumarin, indoline, pyridine, lepidine, quinaldine, 4-bydroxycournarin, benzene, salicylic acid, phenol, phthalate)은 탄소원으로 이용되지 못하였다. euinoline의 분해경로를 규명하기 위하여 catechol dioxygenases의 specific activity를 결정하였다. 그 값은 catechol 1,2-dioxygenase에서 약 184.7 U/mg, 그리고 catechol 1,2-dioxygenase에서 약 33.19 U/mg이었다. 그 결과 균주 NFQ-1은 quinoline를 분해하기 위하여 주로 ortho-분해경로를, 그리고 부분적으로 meta-분해경로를 이용하는 것을 보여주었다.
대전일원의 유류오염 지역의 토양으로부터 원유를 단일 탄소원으로 이용하는 총 144균주를 순수분리 하였고, 이중 유화능과 성장률 그리고 표면장력활성이 가장 우수한 한 균주를 최종 선별하여 형태 및 생리 생화학적 특성을 조사하고 16S rRNA 염기서열을 분석을 통해 Pseudomonas sp. HN37이라 명명하였다. 최종 선별된 Pseudomonas sp. HN37는 여러 종류의 지방족 탄화수소와 3,5-dinitrosalicylic acid와 2,4-dichlorophooxyacetic acid를 단일 탄소원으로 이용하여 성장하였다. 그리고 이 균주는 암피실린과 클로람페니콜 항생제와 Ba, Cr, Li, Mn 중금속에 대해 강한 내성을 갖고 있었고, pH 6.0-9.0과 $30^{\circ}C$에서 성장능과 표면장력활성, 그리고 유화능이 가장 우수한 것으로 확인되었다. 또 Pseudomonas sp. HN37는 1% (v/v) 원유 농도와 1%(w/v) NaCl에서 최대 유화능과 표면장력활성을 나타내었고, LB배지에서 배양 15시간 후에 표면장력활성이 62 dyne/cm에서 27 dyne/cm까지 감소하였다.
Kim, Jung Ho;Sang Ki Choi;Moon Ki Park;Young Ho Kim;Seung Kyo Suh;Cheol Joo Woo;Heui Dong park
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제6권3호
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pp.167-172
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1996
The bacterial strain P2 degrading polychlorinated biphenyls (PCBs) was isolated from the soil around the Shinchun stream in Taegu after enrichment culture in a media containing biphenyl as the sole carbon source. The isolate was identified as a strain of Pseudomonas sp. based on its morphological and physiological characteristics. The optimal conditions of initial pH of media and temperature for growth were 7.0 and $30^{\circ}C$, respectively. Degradation of biphenyl and PCBs was confirmed by GC during the culture of Pseudomonas sp. P2 in a media containing them at a concentration of 500 mg/I. It was observed that Pseudomonas sp. P2 could degrade 97.0$%$ of biphenyl and 60.0$%$ of PCBs after 160 h culture.
Kim, Ki-Pil;Seo, Dong-In;Min, Kyung-Hee;Ka, Jong-Ok;Park, Yong-Keun;Kim, Chi-Kyung
Journal of Microbiology
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제35권4호
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pp.295-299
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1997
Pseudomonas sp. S-47 is capable of transforming 4-chlorobenzoate to 4-chlorocatechol which is subsequently oxidized bty meta-cleavage dioxygenase to prodyce 5-chloro-2-hydroxymuconic semialdehyde. Catechol 2,3-dioxygenase (C23O) produced by Pseudomonas sp. S-47 was purified and characterized in this study. The C23O enzyme was maximally produced in the late logarithmic growth phase, and the temperature and pH for maximunm enzyme activity were $30{\sim}35^{\circ}C$ and 7.0, respectively. The enzyme was purified and concentrated 5 fold from the crude cell extracts through Q Sepharose chromatography and Sephadex G-100 gel filtration after acetone precipitation. The enzyme was identified as consisting of 35 kDa subunits when analyzed by SDS-PAGE. The C23O produced by Pseudomonas sp. S-47 was similar to Xy1E of Pseudomonas putida with respect to substrate specificity for several catecholic compounds.
Pseudomonas sp. BCNU 106 accumulated approximately 4.12 mM trehalose after cultivation of 12 hr probably by the arising action of trehalose-6-phosphate synthase/phosphatase. The cDNA clones of trehalose-6-phosphate synthase/ phosphatase were isolated from Pseudomonas sp. BCNU 106, and named as PsTPS and PsTPP(Pseudomonas sp. BCNU 106 trehalose-6-phosphate synthase/phosphatase). The two mRNA levels of trehalose-6-phosphate synthase/ phosphatase peaked at 12 hr after exposure to toluene, and thereafter were declined slightly These results support an important role of trehalose accumulation by expressions of PsTPS and PsTPP in toluene-tolerance of Pseudomonas sp. BCNU 106.
Pseudomonas sp. DJ77로부터 전보에서 클로닝한 pHENX7의 하류방향으로 약 3kb 정도를 포함하는 pYCS500을 클로닝하였다. PYCS500의 제한효소지도를 작성하고 부분적으로 염기서열을 분석한 결과 465 bp의 HindIII-ClaI절편에서 282 bp로 이루어진 하나의 open reading frame(ORF)을 발견하였다. phnM으로 명명된 이 ORF는 93개의 아미노산으로 구성된 polypeptide를 암호화하고 있었으며 계산된 분자량은 10,008 Da이었다. PhnM은 NahT, XylT, DmpQ, AtdS, PhlG, PhhQ, TbuW 등 plant-type ferredoxin 형태의 단백질과 37.7%-53.9%의 상동성을 나타내었으며 이들이 공통적으로 가지고 있는 motif가 일치하였다.
경기도 일대의 가금류 공장부근 토양로부터 단백질 분해활성이 높은 균주를 분리한 후 이것들 가운데 Keratinolytic protease 생산성이 우수한 균주는 KP-364를 선별하여 효소생산을 위한 최적 배양조건을 검토하였다. 선별된 KP-364 는 형태학적 생화학적 특성을 종합한 결과 Pseudomonas sp 로 동정되었으며 편의상 Pseudomonas sp. KP-364로 명명하였다. 효소생산을 위한 최적 배지조성은 Keratin 0.1% glucose 2.0% soybeam meal 0.5% NaNO3 0.5% KCI 0.2%이었고 초기 pH 6.5 배양온도 $37^{\circ}C$, 48시간진탕 배양할때 효소생산이 가장 우수하였으며 이때의 효소의 역가는 1,270 U/ml/hr이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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